应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE跑膜蛋白为什么会这样
131/2返回列表12下一页
查看: 2788  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

kikiwitch

新虫 (初入文坛)

[交流] SDS-PAGE跑膜蛋白为什么会这样 已有3人参与

第一次跑膜蛋白，用的是TRITON 来溶解的，用的是10%的胶，为什么感觉大部分蛋白都挤在上部分了。

另外，因为我要检测的是cytochrome，细胞色素在菌体的的表达，所以用专门的方法染了一下细胞色素，见下图，从左到右2，4两条是我的sample，其他是control（没有转质粒进去的野生菌株），感觉确实蓝色条带加深了，但都挤在了胶最上方，不知道为什么。

新手发帖，没有金币悬赏，实在抱歉啊。
SDS-PAGE跑膜蛋白为什么会这样
SDS.jpg


SDS-PAGE跑膜蛋白为什么会这样-1
heme staining.jpg

[ Last edited by kikiwitch on 2013-5-23 at 16:28 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-23 16:27:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lzjessie_wlf

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-23 17:12:01
你的膜蛋白应该没有提取出来，还是在细胞膜上吧！在对膜蛋白进行纯化和纯化的时候，要用去污剂将蛋白与细胞膜进行分离，并在去污剂溶解的状态下进行纯化，纯化后膜蛋除去白去污剂再进行重构。你用的triton应该不能（ ...

怎么去除去污剂呀。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2013-05-23 21:39:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

edoz1986

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by lzjessie_wlf at 2013-05-23 21:39:57
怎么去除去污剂呀。...

用普通ｂｕｆｆｅｒ洗柱子就好了啊
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2013-05-23 22:04:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

edoz1986

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-23 18:47:08
你的膜蛋白应该没有提取出来，还是在细胞膜上吧！在对膜蛋白进行纯化和纯化的时候，要用去污剂将蛋白与细胞膜进行分离，并在去污剂溶解的状态下进行纯化，纯化后膜蛋除去白去污剂再进行重构。你用的triton应该不能（或很少）提取溶解吧！
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-23 17:12:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

edoz1986

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-23 18:48:02
引用回帖:
2楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-23 17:12:01
你的膜蛋白应该没有提取出来，还是在细胞膜上吧！在对膜蛋白进行纯化和纯化的时候，要用去污剂将蛋白与细胞膜进行分离，并在去污剂溶解的状态下进行纯化，纯化后膜蛋除去白去污剂再进行重构。你用的triton应该不能（ ...

可以用ddm来溶解膜蛋白，你溶解的时候破碎了吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-23 17:25:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kikiwitch

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-23 17:25:33
可以用ddm来溶解膜蛋白，你溶解的时候破碎了吗？...

是的，我先超声将细胞破碎后，用ultracentrifugation方法将上清与膜分开，之后用
5% wt/vol Triton X-100, 50 mM Hepes pH 7.4, 200 mM NaCl 溶液进行溶解。
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-23 17:38:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kikiwitch

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-23 17:12:01
你的膜蛋白应该没有提取出来，还是在细胞膜上吧！在对膜蛋白进行纯化和纯化的时候，要用去污剂将蛋白与细胞膜进行分离，并在去污剂溶解的状态下进行纯化，纯化后膜蛋除去白去污剂再进行重构。你用的triton应该不能（ ...

但是我查的文献里有这么说的：
(DDM), Triton X-100 (TX-100) and Triton X-114 (TX-114) are commonly used for solubilization of membranes when keeping protein structure and function intact。。。
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-23 17:44:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

edoz1986

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by kikiwitch at 2013-05-23 17:44:51
但是我查的文献里有这么说的：
(DDM), Triton X-100 (TX-100) and Triton X-114 (TX-114) are commonly used for solubilization of membranes when keeping protein structure and function intact。。。

:sh ...

去污剂的提取能力需要做小试取最佳
赞一下 回复此楼
6楼2013-05-23 20:08:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kikiwitch

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-23 22:04:11
用普通ｂｕｆｆｅｒ洗柱子就好了啊...

抱住大牛求详细描述。还有，什么叫小试取啊？本人是膜蛋白入门菜鸟，求指教。
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-24 15:41:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

edoz1986

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-25 22:26:04
用去污剂把蛋白提取出来，然后挂在对应的 柱子上，然后用不含去污剂的buffer洗杂就是了啊
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

lzjessie_wlf
10楼2013-05-24 15:45:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kikiwitch 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +3 钢铁大炮 2026-03-24 3/150 2026-03-24 22:03 by bingxueer79
[考研] 085600材料与化工调剂 +8 A-哆啦Z梦 2026-03-23 13/650 2026-03-24 21:05 by greychen00
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +15 吃吃吃才有意义 2026-03-19 16/800 2026-03-24 19:51 by 了了了了。。
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 274求调剂 +5 顾九笙要谦虚 2026-03-24 5/250 2026-03-24 18:43 by jhhcooi
[考研] 0854 考研调剂 招生了！AI 方向 +5 pk3725069 2026-03-19 17/850 2026-03-24 17:30 by zhouxuan..
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +7 holy J 2026-03-21 7/350 2026-03-24 17:24 by xiaohai104
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 求材料，环境专业调剂 +3 18567500178 2026-03-18 3/150 2026-03-23 23:50 by 热情沙漠
[考研] 考研化学308分求调剂 +7 你好明天你好 2026-03-23 8/400 2026-03-23 18:39 by macy2011
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭