24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1884  |  回复: 8

ying877211

银虫 (小有名气)

[求助] sds-page跑胶问题

向大家请教一个问题,我用TCA沉淀法提取的蛋白质,跑胶时候用水溶解,不容的时候加入NaoH调节至没有沉淀,pH大概在9左右,刚开始的时候都可以跑出条带,后来就一直没有跑出过条带来。后来在网上找到一个方法说用0.1M NaoH溶解即可,使用这个方法还是没有跑出条带来。请大家帮忙分析一下原因。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

学生物的不容易啊!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

foxcl

铁虫 (正式写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 应助指数-1, 谢谢交流,不过不是应助 2012-09-06 05:57:13
我这边是100%TCA沉淀,再用丙酮洗一次,37度烘干后,直接加50ul的5x loading buffer  95度煮5min。  然后直接10ul上样电泳

第一次做,结果明天才能出来。欢迎交流。
2楼2012-09-05 22:54:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

foxcl

铁虫 (正式写手)

今天结果已经出来了,相比于直接上清电泳,分辨率确实有很大的提高。
3楼2012-09-06 09:02:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

m606

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你跑不出来应该先确定你的蛋白在哪里,若没在胶上,看看是不是在你上样前加loadingbuffer煮沸时的沉淀里,确定哪步出了问题,再解决
4楼2012-09-06 09:05:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ying877211

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by m606 at 2012-09-06 09:05:19
你跑不出来应该先确定你的蛋白在哪里,若没在胶上,看看是不是在你上样前加loadingbuffer煮沸时的沉淀里,确定哪步出了问题,再解决

我提的是菌的分泌总蛋白,就是要有很多条带才对。蛋白我测过OD值,也不少,就是跑胶一条带都没有。
学生物的不容易啊!
5楼2012-09-06 09:42:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一楼正解,做了很多TCA沉淀,没听说过用NaOH
坚强面对生活
6楼2012-09-06 09:49:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ying877211

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by loop00 at 2012-09-06 09:49:32
一楼正解,做了很多TCA沉淀,没听说过用NaOH

那你用什么溶解蛋白?请指教。
学生物的不容易啊!
7楼2012-09-07 10:43:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达

我用的最常见的办法,TCA沉淀,丙酮洗涤,Sample Buffer煮样溶解,S含有SDS
坚强面对生活
8楼2012-09-07 12:33:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rhFGF21

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不建议用NaOH,直接用PBS重悬沉淀,在沸水浴中煮10分钟,高温变性溶解。。。
9楼2013-07-06 10:59:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ying877211 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 20:06 by 帕尔马拉特
[考研] 一志愿矿大,材料工程专硕314分,0856可调都可以 +15 无懈可击的巨人 2026-04-09 15/750 2026-04-10 18:10 by hmn_wj
[考研] 材料与化工调剂 +10 否极泰来2026 2026-04-10 11/550 2026-04-10 17:55 by hmn_wj
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385,求调剂 +6 Ezra_Zhang 2026-04-09 6/300 2026-04-10 16:23 by 高维春
[论文投稿] mdpi小修rvr时间四五天了 20+3 哈哈high 2026-04-08 5/250 2026-04-10 16:02 by 北京莱茵润色
[考研] 284求调剂 +18 梵@@ 2026-04-06 18/900 2026-04-10 10:12 by may_新宇
[考研] 求调剂 +15 张zic 2026-04-05 16/800 2026-04-10 08:12 by kangsm
[考研] 0703化学 +31 妮妮ninicgb 2026-04-04 35/1750 2026-04-09 21:06 by zhouxiaoyu
[考研] 调剂 +19 2261744733 2026-04-08 19/950 2026-04-09 19:11 by vgtyfty
[考研] 1U盾记得记得就 +9 sanjin020722 2026-04-08 10/500 2026-04-09 14:11 by 诗与自由
[考研] 求调剂 +7 chenxrlkx 2026-04-05 9/450 2026-04-09 09:04 by wj165256
[考研] 一志愿华南师范大学0702物理学305调剂 +4 念常安 2026-04-07 6/300 2026-04-08 22:53 by bljnqdcc
[考研] 312求调剂 +18 gtw1 2026-04-06 20/1000 2026-04-07 18:16 by 蓝云思雨
[考研] 机械专硕274求调剂,不挑专业学校 +6 泛泛2333 2026-04-05 8/400 2026-04-06 18:06 by 泛泛2333
[考研] 302分 085601求调剂推荐 +11 zyx上岸! 2026-04-05 11/550 2026-04-05 22:13 by dongzh2009
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:13 by 啵啵啵0119
[考研] 326求调剂 +3 顾若浮生 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:32 by 蓝云思雨
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:58 by imissbao
[考研] 考研调剂 +3 mcbbc 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:03 by barlinike
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:08 by 啵啵啵0119
信息提示
请填处理意见