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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » sds-page跑胶问题
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ying877211

银虫 (小有名气)

[求助] sds-page跑胶问题

向大家请教一个问题，我用TCA沉淀法提取的蛋白质，跑胶时候用水溶解，不容的时候加入NaoH调节至没有沉淀，pH大概在9左右，刚开始的时候都可以跑出条带，后来就一直没有跑出过条带来。后来在网上找到一个方法说用0.1M NaoH溶解即可，使用这个方法还是没有跑出条带来。请大家帮忙分析一下原因。
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学生物的不容易啊！
1楼 2012-09-05 08:52:38
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foxcl

铁虫 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 应助指数-1, 谢谢交流，不过不是应助 2012-09-06 05:57:13
我这边是100%TCA沉淀，再用丙酮洗一次，37度烘干后，直接加50ul的5x loading buffer  95度煮5min。  然后直接10ul上样电泳

第一次做，结果明天才能出来。欢迎交流。
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2楼2012-09-05 22:54:03
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foxcl

铁虫 (正式写手)
今天结果已经出来了，相比于直接上清电泳，分辨率确实有很大的提高。
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3楼2012-09-06 09:02:49
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m606

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你跑不出来应该先确定你的蛋白在哪里，若没在胶上，看看是不是在你上样前加loadingbuffer煮沸时的沉淀里，确定哪步出了问题，再解决
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4楼2012-09-06 09:05:19
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ying877211

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by m606 at 2012-09-06 09:05:19
你跑不出来应该先确定你的蛋白在哪里，若没在胶上，看看是不是在你上样前加loadingbuffer煮沸时的沉淀里，确定哪步出了问题，再解决

我提的是菌的分泌总蛋白，就是要有很多条带才对。蛋白我测过OD值，也不少，就是跑胶一条带都没有。
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学生物的不容易啊！
5楼2012-09-06 09:42:18
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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一楼正解，做了很多TCA沉淀，没听说过用NaOH
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坚强面对生活
6楼2012-09-06 09:49:32
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ying877211

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by loop00 at 2012-09-06 09:49:32
一楼正解，做了很多TCA沉淀，没听说过用NaOH

那你用什么溶解蛋白？请指教。
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学生物的不容易啊！
7楼2012-09-07 10:43:28
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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达
我用的最常见的办法，TCA沉淀，丙酮洗涤，Sample Buffer煮样溶解，S含有SDS
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坚强面对生活
8楼2012-09-07 12:33:24
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rhFGF21

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不建议用NaOH，直接用PBS重悬沉淀，在沸水浴中煮10分钟，高温变性溶解。。。
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9楼2013-07-06 10:59:39
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