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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于SDS-PAGE电泳问题
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zyx335588

捐助贵宾 (正式写手)

[求助] 关于SDS-PAGE电泳问题

最近跑SDS_PAGE总是出现拖尾现象，在浓缩胶时跑的挺正常的，但到分离胶后溴酚蓝条带便变的非常宽，考马斯亮蓝热色脱色后见图片，请各位高手帮忙分析一下原因。
电泳条件是：电压浓缩胶80V，分离胶160V；甘氨酸缓冲液为5倍母液稀释；制胶的30%的丙烯酰胺及TEMED为10个月前购买的伯乐产品，浓缩胶1M Tris pH 6.8，分离胶1.5M Tris pH 8.8，10% 过硫酸铵等其他溶液均为新配制，所用电泳仪为伯乐迷你电泳仪。

第一幅图的前两个泳道为菌体加热处理后的样品
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1楼2011-10-11 10:31:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

18853850850

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-10-11 14:42:51
zyx335588(金币+5): 2011-10-15 15:32:56
1.那前两个样品上样量太大
2.分离胶不要用太大电流，用120就行，越大，你的样品制的不好的话，或者是胶本身有问题的话，就越容易拖尾。
3.最有可能的是胶的问题了，具体是哪一部分就得你自己实验来验证了，我以前也遇到过这种问题，换了别人配的试剂就没事了，别外丙烯酰胺不能放过久，祝你好运！
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学自己想知道的
2楼2011-10-11 12:31:53
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菠萝蜜123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by youngker918 at 2011-10-11 15:52:49:
第一，你的上样量太大了，超过了胶孔的承受力；第二，SDS-PAGE电泳前要将样品在沸水浴中煮5分钟，煮后要离心，离心后最多吸80%体积的上清，取出来的上清再离心，离心后得到的上清再用于SDS-PAGE，效果会很好

我想问一下，一般样品都是分装在小的离心管里的，煮的时候也是放在小的离心管里煮，煮后离心，哪有那么小的离心机啊
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7楼2011-11-28 14:45:56
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youngker918

金虫 (正式写手)
先放一个1.5 或2.0 ml的离心管在离心机的孔里，再把0.5 ml的离心管放到1.5 ml的离心管里就可以离心了
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天才就怕不够天才，坏又不够坏，天天都想离开，却不知何处才能换骨脱胎
9楼2011-11-28 17:09:58
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普通回帖

cuiyoutian88

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
lstt09nk(金币+1): 热心虫友，欢迎常来 2011-10-11 14:43:06
上样量过大，或者是电压过大，你试试低电压和小上样量。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2011-10-11 13:18:28
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

1.前几个样品很粗，同时发生扭曲，是上样量太大且盐度不一造成的
2.分离胶不要用太大电流。
3.分离胶后溴酚蓝条带便变的非常宽，最可能的原因是浓缩胶太短，样品没得到很好聚集。或因为浓缩胶pH不准，测之检查。
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4楼2011-10-11 15:14:37
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youngker918

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

第一，你的上样量太大了，超过了胶孔的承受力；第二，SDS-PAGE电泳前要将样品在沸水浴中煮5分钟，煮后要离心，离心后最多吸80%体积的上清，取出来的上清再离心，离心后得到的上清再用于SDS-PAGE，效果会很好
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天才就怕不够天才，坏又不够坏，天天都想离开，却不知何处才能换骨脱胎
5楼2011-10-11 15:52:49
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lxy19870124

铁虫 (初入文坛)
胶的问题，我自己认为是你的制胶板在对照的时候出现问题，简单来说就是你的海绵垫下面吸水不均匀造成的，，一般制胶都会发现两边的空容易出问题，再者就是你的溶剂溶解一定要均匀。
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遇到问题，解决问题。
6楼2011-10-24 16:16:44
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菠萝蜜123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by youngker918 at 2011-10-11 15:52:49:
第一，你的上样量太大了，超过了胶孔的承受力；第二，SDS-PAGE电泳前要将样品在沸水浴中煮5分钟，煮后要离心，离心后最多吸80%体积的上清，取出来的上清再离心，离心后得到的上清再用于SDS-PAGE，效果会很好

煮后离心，样品都是分装在很小的离心管里，哪有那么小的离心机呢
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8楼2011-11-28 14:47:31
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sunnyseu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare: 金币+3, BioEPI+1, 应助指数+1, 鼓励新虫发帖交流 2012-06-08 08:40:22
1.最好在跑胶时候每个孔里的加样量或者说是蛋白浓度保持大致一致。。且蛋白浓度最好是都稀释到od=4.0...这个是我老师摸索出的条件。。这样的浓度跑出的电泳条带比较清晰
2.分离胶的电压太高了。。。最后低于130V
希望能对你有所帮助
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10楼2012-06-07 21:26:35
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