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zyx335588

捐助贵宾 (正式写手)

[求助] 关于SDS-PAGE电泳问题

最近跑SDS_PAGE总是出现拖尾现象,在浓缩胶时跑的挺正常的,但到分离胶后溴酚蓝条带便变的非常宽,考马斯亮蓝热色脱色后见图片,请各位高手帮忙分析一下原因。
电泳条件是:电压浓缩胶80V,分离胶160V;甘氨酸缓冲液为5倍母液稀释;制胶的30%的丙烯酰胺及TEMED为10个月前购买的伯乐产品,浓缩胶1M Tris pH 6.8,分离胶1.5M Tris pH 8.8,10% 过硫酸铵等其他溶液均为新配制,所用电泳仪为伯乐迷你电泳仪。

第一幅图的前两个泳道为菌体加热处理后的样品



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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

1.前几个样品很粗,同时发生扭曲,是上样量太大且盐度不一造成的
2.分离胶不要用太大电流。
3.分离胶后溴酚蓝条带便变的非常宽,最可能的原因是浓缩胶太短,样品没得到很好聚集。或因为浓缩胶pH不准,测之检查。
4楼2011-10-11 15:14:37
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