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friya0910

新虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE电泳遇到的问题

今天第一次跑SDS-PAGE,用的是伯乐的电泳仪和配套电泳槽,没有说明书之前也没人用过,在设置的时候就设了100V电压,电流什么的都没改,还是默认参数,好像显示的是500mA吧,可是开始跑的时候电流居然到了300-400mA,是不是太大了啊?后来就把电流设为50mA,于是就变成恒流跑了,电压也就20多点,上不去啊?
想请问一下这是怎么回事啊?
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friya0910

新虫 (正式写手)

引用回帖:
25楼: Originally posted by 小婧子zj at 2011-09-06 10:05:56:
就是想问你外液内液的量,外液要加少呀  或者可以放在冰里面跑着试试呢

外液加到电泳槽上显示的两块胶的刻度,内液加满,两者没有接触,我是放在冰上跑的,昨天用60V跑了3h,电流在200mA左右,结果还行吧!我在想是不是迷你的电泳槽电压就不能调很高啊!
26楼2011-09-06 10:14:14
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普通回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
friya0910(金币+2): 2011-08-29 16:50:45
西瓜(金币+2): good 2011-08-29 17:47:35
第一,缓冲液长时间没换
第二,错把缓冲液母液倒进去跑胶
第三,槽子问题或者是封槽子问题,正负极之间有部分相同(垂直胶)
第四,配胶的液体有问题
真相是最大的奢侈品
2楼2011-08-29 16:45:19
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friya0910

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-08-29 16:45:19:
第一,缓冲液长时间没换
第二,错把缓冲液母液倒进去跑胶
第三,槽子问题或者是封槽子问题,正负极之间有部分相同(垂直胶)
第四,配胶的液体有问题

缓冲液是新配的啊,母液是5×的,稀释后才加的啊,槽子应该没有问题吧,是新的伯乐的电泳槽,不太明白“封槽子问题,正负极之间有部分相同”是什么意思。配胶的液体也都是新配的啊,pH也都调过的,会有什么问题呢,郁闷啊……
3楼2011-08-29 16:50:36
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friya0910

新虫 (正式写手)

西瓜: 你应该说下你用的缓冲液是什么。我们用新的1XTAE是60~80mA,用得越久电流越大,一般到了130mA我们就换缓冲液了。 2011-08-29 17:48:58
引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-08-29 16:45:19:
第一,缓冲液长时间没换
第二,错把缓冲液母液倒进去跑胶
第三,槽子问题或者是封槽子问题,正负极之间有部分相同(垂直胶)
第四,配胶的液体有问题

想问一下,如果正常的情况下,恒压100v跑的话,电流一般都是多少啊?
4楼2011-08-29 16:51:46
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
friya0910(金币+1): 2011-08-29 17:07:54
dhd997(金币+2): good 2011-09-02 12:02:03
如果是很小的那种伯乐,100伏跑有点高,我们跑的时候只让用50伏,你是水平琼脂糖胶,30-40伏差不多。
100V 我们用的国产,估计有200mA
真相是最大的奢侈品
5楼2011-08-29 16:54:59
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

封槽子的事情发生于垂直胶,跟这个没有关系
真相是最大的奢侈品
6楼2011-08-29 16:56:00
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): 很热心,一起奖励了 2011-08-29 17:49:26
分子实验,拿着分析克隆手册,一般都不会出现问题。
真相是最大的奢侈品
7楼2011-08-29 16:56:56
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friya0910

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wanhscn at 2011-08-29 16:54:59:
如果是很小的那种伯乐,100伏跑有点高,我们跑的时候只让用50伏,你是水平琼脂糖胶,30-40伏差不多。
100V 我们用的国产,估计有200mA

我用的是伯乐小型的,为什么这个不能跑100啊?我看网上很多都跑100还有150的呢,我做的不是水平琼脂糖胶,我做的是聚丙烯酰胺凝胶。
8楼2011-08-29 17:09:01
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friya0910

新虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wanhscn at 2011-08-29 16:56:00:
封槽子的事情发生于垂直胶,跟这个没有关系

我用的就是垂直胶啊!
9楼2011-08-29 17:09:35
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friya0910

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wanhscn at 2011-08-29 16:56:56:
分子实验,拿着分析克隆手册,一般都不会出现问题。

木有这本书,而且本人也不是分子出身,也没人知道,所以很郁闷……
10楼2011-08-29 17:10:13
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