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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE电泳遇到的问题
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friya0910

新虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE电泳遇到的问题

今天第一次跑SDS-PAGE，用的是伯乐的电泳仪和配套电泳槽，没有说明书之前也没人用过，在设置的时候就设了100V电压，电流什么的都没改，还是默认参数，好像显示的是500mA吧，可是开始跑的时候电流居然到了300-400mA，是不是太大了啊？后来就把电流设为50mA，于是就变成恒流跑了，电压也就20多点，上不去啊？
想请问一下这是怎么回事啊？
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1楼 2011-08-29 16:29:02
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
25楼: Originally posted by 小婧子zj at 2011-09-06 10:05:56:
就是想问你外液内液的量，外液要加少呀  或者可以放在冰里面跑着试试呢

外液加到电泳槽上显示的两块胶的刻度，内液加满，两者没有接触，我是放在冰上跑的，昨天用60V跑了3h，电流在200mA左右，结果还行吧！我在想是不是迷你的电泳槽电压就不能调很高啊！
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26楼2011-09-06 10:14:14
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普通回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
friya0910(金币+2): 2011-08-29 16:50:45
西瓜(金币+2): good 2011-08-29 17:47:35
第一，缓冲液长时间没换
第二，错把缓冲液母液倒进去跑胶
第三，槽子问题或者是封槽子问题，正负极之间有部分相同（垂直胶）
第四，配胶的液体有问题
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真相是最大的奢侈品
2楼2011-08-29 16:45:19
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-08-29 16:45:19:
第一，缓冲液长时间没换
第二，错把缓冲液母液倒进去跑胶
第三，槽子问题或者是封槽子问题，正负极之间有部分相同（垂直胶）
第四，配胶的液体有问题

缓冲液是新配的啊，母液是5×的，稀释后才加的啊，槽子应该没有问题吧，是新的伯乐的电泳槽，不太明白“封槽子问题，正负极之间有部分相同”是什么意思。配胶的液体也都是新配的啊，pH也都调过的，会有什么问题呢，郁闷啊……
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3楼2011-08-29 16:50:36
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friya0910

新虫 (正式写手)
西瓜: 你应该说下你用的缓冲液是什么。我们用新的1XTAE是60~80mA，用得越久电流越大，一般到了130mA我们就换缓冲液了。 2011-08-29 17:48:58
引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-08-29 16:45:19:
第一，缓冲液长时间没换
第二，错把缓冲液母液倒进去跑胶
第三，槽子问题或者是封槽子问题，正负极之间有部分相同（垂直胶）
第四，配胶的液体有问题

想问一下，如果正常的情况下，恒压100v跑的话，电流一般都是多少啊？
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4楼2011-08-29 16:51:46
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
friya0910(金币+1): 2011-08-29 17:07:54
dhd997(金币+2): good 2011-09-02 12:02:03
如果是很小的那种伯乐，100伏跑有点高，我们跑的时候只让用50伏，你是水平琼脂糖胶，30-40伏差不多。
100V 我们用的国产，估计有200mA
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真相是最大的奢侈品
5楼2011-08-29 16:54:59
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
封槽子的事情发生于垂直胶，跟这个没有关系
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真相是最大的奢侈品
6楼2011-08-29 16:56:00
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): 很热心，一起奖励了 2011-08-29 17:49:26
分子实验，拿着分析克隆手册，一般都不会出现问题。
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真相是最大的奢侈品
7楼2011-08-29 16:56:56
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wanhscn at 2011-08-29 16:54:59:
如果是很小的那种伯乐，100伏跑有点高，我们跑的时候只让用50伏，你是水平琼脂糖胶，30-40伏差不多。
100V 我们用的国产，估计有200mA

我用的是伯乐小型的，为什么这个不能跑100啊？我看网上很多都跑100还有150的呢，我做的不是水平琼脂糖胶，我做的是聚丙烯酰胺凝胶。
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8楼2011-08-29 17:09:01
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wanhscn at 2011-08-29 16:56:00:
封槽子的事情发生于垂直胶，跟这个没有关系

我用的就是垂直胶啊！
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9楼2011-08-29 17:09:35
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wanhscn at 2011-08-29 16:56:56:
分子实验，拿着分析克隆手册，一般都不会出现问题。

木有这本书，而且本人也不是分子出身，也没人知道，所以很郁闷……
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10楼2011-08-29 17:10:13
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