24小时热门版块排行榜    

查看: 4807  |  回复: 12
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zyx335588

捐助贵宾 (正式写手)

[求助] 关于SDS-PAGE电泳问题

最近跑SDS_PAGE总是出现拖尾现象,在浓缩胶时跑的挺正常的,但到分离胶后溴酚蓝条带便变的非常宽,考马斯亮蓝热色脱色后见图片,请各位高手帮忙分析一下原因。
电泳条件是:电压浓缩胶80V,分离胶160V;甘氨酸缓冲液为5倍母液稀释;制胶的30%的丙烯酰胺及TEMED为10个月前购买的伯乐产品,浓缩胶1M Tris pH 6.8,分离胶1.5M Tris pH 8.8,10% 过硫酸铵等其他溶液均为新配制,所用电泳仪为伯乐迷你电泳仪。

第一幅图的前两个泳道为菌体加热处理后的样品



回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

1.前几个样品很粗,同时发生扭曲,是上样量太大且盐度不一造成的
2.分离胶不要用太大电流。
3.分离胶后溴酚蓝条带便变的非常宽,最可能的原因是浓缩胶太短,样品没得到很好聚集。或因为浓缩胶pH不准,测之检查。
4楼2011-10-11 15:14:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

18853850850

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-10-11 14:42:51
zyx335588(金币+5): 2011-10-15 15:32:56
1.那前两个样品上样量太大
2.分离胶不要用太大电流,用120就行,越大,你的样品制的不好的话,或者是胶本身有问题的话,就越容易拖尾。
3.最有可能的是胶的问题了,具体是哪一部分就得你自己实验来验证了,我以前也遇到过这种问题,换了别人配的试剂就没事了,别外丙烯酰胺不能放过久,祝你好运!
学自己想知道的
2楼2011-10-11 12:31:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuiyoutian88

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


lstt09nk(金币+1): 热心虫友,欢迎常来 2011-10-11 14:43:06
上样量过大,或者是电压过大,你试试低电压和小上样量。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2011-10-11 13:18:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngker918

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

第一,你的上样量太大了,超过了胶孔的承受力;第二,SDS-PAGE电泳前要将样品在沸水浴中煮5分钟,煮后要离心,离心后最多吸80%体积的上清,取出来的上清再离心,离心后得到的上清再用于SDS-PAGE,效果会很好
天才就怕不够天才,坏又不够坏,天天都想离开,却不知何处才能换骨脱胎
5楼2011-10-11 15:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +11 kulium 2026-08-21 14/700 2026-08-24 02:12 by 流流伤
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +4 炎黄贵胄 2026-08-22 5/250 2026-08-24 02:09 by 流流伤
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 让我中一个面上吧! +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖? +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见