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zyx335588

捐助贵宾 (正式写手)

[求助] 关于SDS-PAGE电泳问题

最近跑SDS_PAGE总是出现拖尾现象,在浓缩胶时跑的挺正常的,但到分离胶后溴酚蓝条带便变的非常宽,考马斯亮蓝热色脱色后见图片,请各位高手帮忙分析一下原因。
电泳条件是:电压浓缩胶80V,分离胶160V;甘氨酸缓冲液为5倍母液稀释;制胶的30%的丙烯酰胺及TEMED为10个月前购买的伯乐产品,浓缩胶1M Tris pH 6.8,分离胶1.5M Tris pH 8.8,10% 过硫酸铵等其他溶液均为新配制,所用电泳仪为伯乐迷你电泳仪。

第一幅图的前两个泳道为菌体加热处理后的样品



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youngker918

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

第一,你的上样量太大了,超过了胶孔的承受力;第二,SDS-PAGE电泳前要将样品在沸水浴中煮5分钟,煮后要离心,离心后最多吸80%体积的上清,取出来的上清再离心,离心后得到的上清再用于SDS-PAGE,效果会很好
天才就怕不够天才,坏又不够坏,天天都想离开,却不知何处才能换骨脱胎
5楼2011-10-11 15:52:49
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youngker918

金虫 (正式写手)

先放一个1.5 或2.0 ml的离心管在离心机的孔里,再把0.5 ml的离心管放到1.5 ml的离心管里就可以离心了
天才就怕不够天才,坏又不够坏,天天都想离开,却不知何处才能换骨脱胎
9楼2011-11-28 17:09:58
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