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zyx335588

捐助贵宾 (正式写手)

[求助] 关于SDS-PAGE电泳问题

最近跑SDS_PAGE总是出现拖尾现象,在浓缩胶时跑的挺正常的,但到分离胶后溴酚蓝条带便变的非常宽,考马斯亮蓝热色脱色后见图片,请各位高手帮忙分析一下原因。
电泳条件是:电压浓缩胶80V,分离胶160V;甘氨酸缓冲液为5倍母液稀释;制胶的30%的丙烯酰胺及TEMED为10个月前购买的伯乐产品,浓缩胶1M Tris pH 6.8,分离胶1.5M Tris pH 8.8,10% 过硫酸铵等其他溶液均为新配制,所用电泳仪为伯乐迷你电泳仪。

第一幅图的前两个泳道为菌体加热处理后的样品



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cuiyoutian88

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


lstt09nk(金币+1): 热心虫友,欢迎常来 2011-10-11 14:43:06
上样量过大,或者是电压过大,你试试低电压和小上样量。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2011-10-11 13:18:28
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18853850850

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-10-11 14:42:51
zyx335588(金币+5): 2011-10-15 15:32:56
1.那前两个样品上样量太大
2.分离胶不要用太大电流,用120就行,越大,你的样品制的不好的话,或者是胶本身有问题的话,就越容易拖尾。
3.最有可能的是胶的问题了,具体是哪一部分就得你自己实验来验证了,我以前也遇到过这种问题,换了别人配的试剂就没事了,别外丙烯酰胺不能放过久,祝你好运!
学自己想知道的
2楼2011-10-11 12:31:53
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

1.前几个样品很粗,同时发生扭曲,是上样量太大且盐度不一造成的
2.分离胶不要用太大电流。
3.分离胶后溴酚蓝条带便变的非常宽,最可能的原因是浓缩胶太短,样品没得到很好聚集。或因为浓缩胶pH不准,测之检查。
4楼2011-10-11 15:14:37
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youngker918

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

第一,你的上样量太大了,超过了胶孔的承受力;第二,SDS-PAGE电泳前要将样品在沸水浴中煮5分钟,煮后要离心,离心后最多吸80%体积的上清,取出来的上清再离心,离心后得到的上清再用于SDS-PAGE,效果会很好
天才就怕不够天才,坏又不够坏,天天都想离开,却不知何处才能换骨脱胎
5楼2011-10-11 15:52:49
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