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zyx335588

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[求助] 关于SDS-PAGE电泳问题

最近跑SDS_PAGE总是出现拖尾现象，在浓缩胶时跑的挺正常的，但到分离胶后溴酚蓝条带便变的非常宽，考马斯亮蓝热色脱色后见图片，请各位高手帮忙分析一下原因。
电泳条件是：电压浓缩胶80V，分离胶160V；甘氨酸缓冲液为5倍母液稀释；制胶的30%的丙烯酰胺及TEMED为10个月前购买的伯乐产品，浓缩胶1M Tris pH 6.8，分离胶1.5M Tris pH 8.8，10% 过硫酸铵等其他溶液均为新配制，所用电泳仪为伯乐迷你电泳仪。

第一幅图的前两个泳道为菌体加热处理后的样品

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1楼 2011-10-11 10:31:03

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菠萝蜜123

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引用回帖:

5楼: Originally posted by youngker918 at 2011-10-11 15:52:49:
第一，你的上样量太大了，超过了胶孔的承受力；第二，SDS-PAGE电泳前要将样品在沸水浴中煮5分钟，煮后要离心，离心后最多吸80%体积的上清，取出来的上清再离心，离心后得到的上清再用于SDS-PAGE，效果会很好

我想问一下，一般样品都是分装在小的离心管里的，煮的时候也是放在小的离心管里煮，煮后离心，哪有那么小的离心机啊