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ywmwiw

新虫 (初入文坛)

[交流] SDS-PAGE凝胶电泳求教 已有9人参与

最近一直在跑凝胶电泳,Marker的条带应该有6条,可是跑了无数次都只跑出了5条,只有偶尔能跑出6条(跑出6条的机率跟中大奖差不多),曾请教过一位师姐,得知电流太大,之后按浓缩胶(50v,28-33mA)分离胶(80v,38-43mA)跑了几次都不成功(师姐能跑出来了),胶的各种配方和每块胶都是本人自己配的(包括师姐跑的那次),请问各位高手这是为什么呢?
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rice1007

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-25 13:51:34
本帖内容被屏蔽

2楼2012-04-25 11:28:57
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
那就是你的人品问题了~~~~~~~~
每天坚持多一点,以后困难少一点!
3楼2012-04-25 16:32:10
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rhguo

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-26 15:52:38
同样的问题我也碰到过,到现在也是这样,这种情况往往会以胶的底部有一条线,线,最后一条Marker就在那条线上面,染色的时候线以下什么条带都没有了,线以上正常染色;至于 为什么会形成那条线,我现在也不知道;估计是前面的蛋白都积在一起了,分不开,可能是SDS不够处理样品的时候可以多加一些上样缓冲液,在电泳缓冲液里稍微多加一些SDS看下效果
4楼2012-04-25 19:53:47
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horsw

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
分离胶缓冲液pH没调准的可能性很大
5楼2012-04-26 00:10:08
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ywmwiw

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by rice1007 at 2012-04-25 11:28:57:
可能原因有三:
1、其中一条被降解了。
2、跑的时间过长,最小那条带跑出胶去了。
3、跑的时间过短,最大那条带在胶的最上部,没有浓缩好,看不出来。

那浓缩胶、分离胶分别要跑多久呢?
6楼2012-04-26 10:10:43
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ywmwiw

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 0624410024 at 2012-04-25 16:32:10:
那就是你的人品问题了~~~~~~~~

7楼2012-04-26 10:11:23
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ywmwiw

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by rhguo at 2012-04-25 19:53:47:
同样的问题我也碰到过,到现在也是这样,这种情况往往会以胶的底部有一条线,线,最后一条Marker就在那条线上面,染色的时候线以下什么条带都没有了,线以上正常染色;至于 为什么会形成那条线,我现在也不知道; ...

上样缓冲液是loading buffer吗?照你的方法,你有做成功的吗?
8楼2012-04-26 10:15:56
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ywmwiw

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by horsw at 2012-04-26 00:10:08:
分离胶缓冲液pH没调准的可能性很大

9楼2012-04-26 10:17:00
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Diacetyl

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
SDS-PAGE 一直120V 90-120 min, 你可以加大分离胶的浓度,1-1.5个百分点
10楼2012-04-26 11:09:33
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