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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE凝胶电泳求教
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ywmwiw

新虫 (初入文坛)

[交流] SDS-PAGE凝胶电泳求教 已有9人参与

最近一直在跑凝胶电泳，Marker的条带应该有6条，可是跑了无数次都只跑出了5条，只有偶尔能跑出6条（跑出6条的机率跟中大奖差不多），曾请教过一位师姐，得知电流太大，之后按浓缩胶（50v，28-33mA）分离胶（80v，38-43mA）跑了几次都不成功（师姐能跑出来了），胶的各种配方和每块胶都是本人自己配的（包括师姐跑的那次），请问各位高手这是为什么呢？
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1楼 2012-04-25 11:16:26
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rice1007

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-25 13:51:34
本帖内容被屏蔽
2楼2012-04-25 11:28:57
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那就是你的人品问题了～～～～～～～～
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每天坚持多一点，以后困难少一点！
3楼2012-04-25 16:32:10
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rhguo

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-26 15:52:38
同样的问题我也碰到过，到现在也是这样，这种情况往往会以胶的底部有一条线，线，最后一条Marker就在那条线上面，染色的时候线以下什么条带都没有了，线以上正常染色；至于 为什么会形成那条线，我现在也不知道；估计是前面的蛋白都积在一起了，分不开，可能是SDS不够处理样品的时候可以多加一些上样缓冲液，在电泳缓冲液里稍微多加一些SDS看下效果
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4楼2012-04-25 19:53:47
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horsw

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
分离胶缓冲液pH没调准的可能性很大
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5楼2012-04-26 00:10:08
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ywmwiw

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by rice1007 at 2012-04-25 11:28:57:
可能原因有三：
1、其中一条被降解了。
2、跑的时间过长，最小那条带跑出胶去了。
3、跑的时间过短，最大那条带在胶的最上部，没有浓缩好，看不出来。

那浓缩胶、分离胶分别要跑多久呢？
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6楼2012-04-26 10:10:43
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ywmwiw

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 0624410024 at 2012-04-25 16:32:10:
那就是你的人品问题了～～～～～～～～

7楼2012-04-26 10:11:23
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ywmwiw

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by rhguo at 2012-04-25 19:53:47:
同样的问题我也碰到过，到现在也是这样，这种情况往往会以胶的底部有一条线，线，最后一条Marker就在那条线上面，染色的时候线以下什么条带都没有了，线以上正常染色；至于 为什么会形成那条线，我现在也不知道； ...

上样缓冲液是loading buffer吗？照你的方法，你有做成功的吗？
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8楼2012-04-26 10:15:56
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ywmwiw

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by horsw at 2012-04-26 00:10:08:
分离胶缓冲液pH没调准的可能性很大

9楼2012-04-26 10:17:00
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Diacetyl

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
SDS-PAGE 一直120V 90-120 min， 你可以加大分离胶的浓度，1-1.5个百分点
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10楼2012-04-26 11:09:33
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