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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE超低分子量电泳实验
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海王之心2751

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE超低分子量电泳实验

我现在在做超低分子量凝胶电泳遇到了这样一个问题，具体如图：左边的1号样和左边的10、11、12号样，跑得很慢，基本上停在那。本图是跑了5h的图，等到左边那三号样跑完要12h以上。做了两次实验都是这样，而且两次都是两边跑不下去。配胶的试剂及配置比例均按厂家给的说明书来配置的。唯一没有按厂家配置的溶液是阴极缓冲液中的Tricine(三羟甲基甘氨酸)换成了甘氨酸，因为我这里没有Tricine.
     请高手指点，是什么原因导致两边跑步下去的？

电泳跑胶图
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1楼 2012-03-03 17:07:17
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-03-04 15:31:25
你图上的是溴酚蓝指示剂，并不是真正蛋白，所以有可能蛋白是跑的好的。最好还是以染色的为准。如果蛋白也没跑好，应该是胶制备时出现了问题吧，看你图上其他的泳道都跑的一致，就边上的慢，有可能是胶的问题。最好重复制备一块胶看看
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2楼2012-03-03 17:20:12
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, Good! 2012-03-17 15:17:20
低分子量要用Tricine SDS-PAGE，普通SDS-PAGE小分子都看不到。
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3楼2012-03-03 17:23:42
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
总蛋白量少的泳道可能会跑得慢。要是每次都这样，试着减少跑的慢的用到的进样量。另外看看内槽的缓冲也是不是少了，少了也有可能跑成这样。
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4楼2012-03-04 09:54:42
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我要长大

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也遇到过像你这样的问题，把凝胶时间加长会好些吧。
祝你好运
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5楼2012-03-05 15:34:57
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海王之心2751

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiaxinfish at 2012-03-03 17:20:12:
你图上的是溴酚蓝指示剂，并不是真正蛋白，所以有可能蛋白是跑的好的。最好还是以染色的为准。如果蛋白也没跑好，应该是胶制备时出现了问题吧，看你图上其他的泳道都跑的一致，就边上的慢，有可能是胶的问题。最好 ...

首先，谢谢你的帮助，跑完后，固定-染色-脱色，结果是蛋白质没有跑好，我自己怀疑是胶有问题。但是奇怪的是浓缩胶和夹层胶不会，和低分子量SDS-PAGE电泳一样，跑的很好，只是到了分离就跑成那样，只是分离胶里要加甘油，但是搅拌加5min超声肯定是充分溶解了呀 ！郁闷不知道啥原因。
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为梦想努力拼搏！
6楼2012-03-17 14:53:35
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海王之心2751

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 分子菜鸟 at 2012-03-04 09:54:42:
总蛋白量少的泳道可能会跑得慢。要是每次都这样，试着减少跑的慢的用到的进样量。另外看看内槽的缓冲也是不是少了，少了也有可能跑成这样。

谢谢  缓冲液 没有少 。
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为梦想努力拼搏！
7楼2012-03-17 14:54:35
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