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海王之心2751

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE超低分子量电泳实验

我现在在做超低分子量凝胶电泳遇到了这样一个问题,具体如图:左边的1号样和左边的10、11、12号样,跑得很慢,基本上停在那。本图是跑了5h的图,等到左边那三号样跑完要12h以上。做了两次实验都是这样,而且两次都是两边跑不下去。配胶的试剂及配置比例均按厂家给的说明书来配置的。唯一没有按厂家配置的溶液是阴极缓冲液中的Tricine(三羟甲基甘氨酸)换成了甘氨酸,因为我这里没有Tricine.
     请高手指点,是什么原因导致两边跑步下去的?

电泳跑胶图
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-03-04 15:31:25
你图上的是溴酚蓝指示剂,并不是真正蛋白,所以有可能蛋白是跑的好的。最好还是以染色的为准。如果蛋白也没跑好,应该是胶制备时出现了问题吧,看你图上其他的泳道都跑的一致,就边上的慢,有可能是胶的问题。最好重复制备一块胶看看
2楼2012-03-03 17:20:12
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, Good! 2012-03-17 15:17:20
低分子量要用Tricine SDS-PAGE,普通SDS-PAGE小分子都看不到。
3楼2012-03-03 17:23:42
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
总蛋白量少的泳道可能会跑得慢。要是每次都这样,试着减少跑的慢的用到的进样量。另外看看内槽的缓冲也是不是少了,少了也有可能跑成这样。
4楼2012-03-04 09:54:42
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我要长大

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也遇到过像你这样的问题,把凝胶时间加长会好些吧。
祝你好运
5楼2012-03-05 15:34:57
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海王之心2751

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jiaxinfish at 2012-03-03 17:20:12:
你图上的是溴酚蓝指示剂,并不是真正蛋白,所以有可能蛋白是跑的好的。最好还是以染色的为准。如果蛋白也没跑好,应该是胶制备时出现了问题吧,看你图上其他的泳道都跑的一致,就边上的慢,有可能是胶的问题。最好 ...

首先,谢谢你的帮助,跑完后,固定-染色-脱色,结果是蛋白质没有跑好,我自己怀疑是胶有问题。但是奇怪的是浓缩胶和夹层胶不会,和低分子量SDS-PAGE电泳一样,跑的很好,只是到了分离就跑成那样,只是分离胶里要加甘油,但是搅拌加5min超声肯定是充分溶解了呀 !郁闷不知道啥原因。
为梦想努力拼搏!
6楼2012-03-17 14:53:35
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海王之心2751

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 分子菜鸟 at 2012-03-04 09:54:42:
总蛋白量少的泳道可能会跑得慢。要是每次都这样,试着减少跑的慢的用到的进样量。另外看看内槽的缓冲也是不是少了,少了也有可能跑成这样。

谢谢  缓冲液 没有少 。
为梦想努力拼搏!
7楼2012-03-17 14:54:35
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