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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关SDS-PAGE电泳
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caojinxuan

银虫 (正式写手)

[求助] 有关SDS-PAGE电泳

大家好，有些关于SDS-PAGE的电泳问题请教大家
1  本人在电泳过程中刚开始样品在浓缩胶中使用的是80V电压，可是条带跑得很慢，差不多要跑2个小时才能到分离胶，这是为什么？
2  后来样品进入分离胶后使用的电压是120V，但速度太慢，就改为160V，发现外板很烫，不知道这样会不会影响最后的结果？
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1楼2011-04-23 13:54:24
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2): 有可能 2011-04-25 09:52:42
可能是电泳缓冲液的问题，浓度不对或者用的次数多了。
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2楼2011-04-23 19:42:10
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

caojinxuan(金币+8): 2011-04-25 09:25:43
你用的电泳系统是什么的，有的电泳槽要注意内液比外液高，不然的话就会出现跑的很慢的现象。
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3楼2011-04-23 19:55:55
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caojinxuan

银虫 (正式写手)
操作的时候确实内液比外液高
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4楼2011-04-25 09:26:44
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caojinxuan

银虫 (正式写手)
电泳缓冲液每次都是新配的
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5楼2011-04-25 09:27:37
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piaopiao233

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的蛋白浓度是多少？以前别人用的时候也是这样的吗？
你们的蛋白电泳仪器是什么规格的呢？
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6楼2011-04-25 09:58:11
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你再看看是不是电泳槽上的金属棒松了。。。
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7楼2011-04-25 09:58:34
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caojinxuan

银虫 (正式写手)
蛋白浓度没测，因为是刚诱导出来，所以想先跑个SDS看是不是有我表达的目的蛋白
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8楼2011-04-27 12:22:22
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rhy1027

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

温度太高的话会导致样品扩撒严重，条带变糊了！可以考虑调整一下running buffer的离子强度，然后跑胶的时候可以给里面放个冰盒，或者把电泳槽埋在冰里跑！不过普通的SDS-PAGE很少会发热严重的情况！Native PAGE常见，跑过夜都很正常。
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9楼2011-04-27 12:43:03
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