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stteria

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求教SDS-PAGE问题

第一次，跑得很正常，但因为样品有点降解了，所以只当是练习了；
第二次，把样品浓度从原来的6mg/ml降到4mg/ml（因为资料中说样品浓度为4mg/ml），一切都很顺利，但是却没跑出来条带（溴酚蓝是跑到底了，但是染色后发现分离胶里面只有溴酚蓝跑过的轨迹后形成的一长条带，并没有蛋白的小条带）；
第三次，以为是制胶过程有问题，重新做了一遍，样品还是原先4mg/ml处理好的样品，结果跟第二次一样。

是不是样品有问题？是浓度太低？还是还原液处理得不够仔细（是在91-95度范围内加热还原了9、10分钟）？或者还有别的原因？请高人指教啊

[ Last edited by stteria on 2011-6-23 at 20:22 ]
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1楼 2011-06-23 20:14:11
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leimiao_hit

木虫之王 (文学泰斗)

小元

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-06-23 23:16:12
样品有问题，不大可能是浓度太低
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..........回首向来萧瑟处，归去，也无风雨也无晴...........
2楼2011-06-23 20:34:32
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎交流。专家辛苦了！ 2011-06-23 23:16:35
肯定是样品的问题，降解或者没处理好。
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3楼2011-06-23 20:57:18
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aayqaa

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-23 23:16:47
如果一条带都没跑出来那也可能是胶的问题
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4楼2011-06-23 21:57:29
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zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎交流 2011-06-24 10:42:13
初步判断不像是胶的问题，像是样品问题，但是4mg/ml的浓度跑胶是没问题的。
跑胶的时候带个别人样品作对照很容易就知道是不是胶的问题了。
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5楼2011-06-24 10:10:24
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susanbao

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很专业！ 2011-06-24 16:19:16
stteria(金币+1): 谢谢，我也觉得样品有问题，重新制了 2011-08-18 14:50:21
看Marker来判断是不是胶的问题，根据你的情况，浓度肯定是够了，一个泳道1ug就可以很明显，SDS-PAGE的分辨率在10ng，但是上样量控制在4-5ug是比较合适的。根据你的情况，我估计是不是蛋白聚集，然后挂在胶孔上了，建议你用8M尿素把蛋白溶解，然后加点DTT，会有比较好的结果的，继续努力！
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6楼2011-06-24 11:51:12
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