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fly9081

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教,SDS-PAGE的问题已有11人参与

跑SDS-PAGE之前,蛋白要进行变性,但在之前的一些步骤中,(如若采取超声破碎,)都要防止蛋白变性,为什么?谢谢大家!
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


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木有吧,超声你说的是冰浴?那个是怕蛋白酶
2楼2010-05-17 21:39:53
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zhjun84

铜虫 (初入文坛)


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跑SDS-PAGE之前,蛋白要进行变性,但在之前的一些步骤中,(如若采取超声破碎,)都要防止蛋白变性,为什么?谢谢大家


前面主要是分离蛋白,后面跑胶 需要 和sds结合
3楼2010-05-17 22:04:27
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师

电泳目的首先要搞清楚!!!电泳一般来说是为了坚定实验结果,所以即使蛋白质变形了也没事,但是你要提取纯化蛋白质那就不一样了!!!大多数情况下电泳只是一种检测、坚定的手段!所以会不一样!!!
大家共同交流、共同提高!!!
4楼2010-05-17 23:28:32
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小白兄

金虫 (小有名气)

超声怕蛋白变性是怕弄错蛋白的可溶解性。sds跑胶前的变性是为了使蛋白解聚
时光如流水,匆匆而过。
5楼2010-05-17 23:43:39
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jskyp

木虫 (小有名气)

助理研究员



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蛋白变性是必须的,前提是防止蛋白的降解。
6楼2010-05-18 00:12:05
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piupme

铜虫 (小有名气)


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这个蛋白质变性,SDS浓度有要求吗?
7楼2010-05-18 00:39:15
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段家一凡

木虫 (正式写手)


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引用回帖:
Originally posted by fly9081 at 2010-05-17 21:37:47:
跑SDS-PAGE之前,蛋白要进行变性,但在之前的一些步骤中,(如若采取超声破碎,)都要防止蛋白变性,为什么?谢谢大家!

超声破壁会产生热量,如果不冰浴的话,就会变性,如果你只是看看蛋白有无表达,变不变性就无所谓了,但如果你需要有活性的蛋白,变性就不行了。
8楼2010-05-18 00:40:33
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匿名

用户注销 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
本帖仅楼主可见
9楼2010-05-18 01:19:47
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haoxiaoyu380

银虫 (小有名气)


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引用回帖:
Originally posted by 彬心玉壶 at 2010-05-18 01:19:47:
SDS-PAGE的目的只是检测有没有你的目的蛋白,
并不是所有的蛋白都拿去跑SDS-PAGE了, 只是去了很少的一部分,例如10ul之类,

而前面提蛋白保持低温就是为了减少蛋白被降解的速度, 保证有更多的目的蛋白或者更高 ...

同意上述。跑胶只用了极少一点变性也没关系啊,反正跑过胶的蛋白又不回收。验证后再测其他性能就用不变性的呗
Enjoyyourself!Enjoyeveryday~~
10楼2010-05-18 07:36:15
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