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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教，SDS-PAGE的问题
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fly9081

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教，SDS-PAGE的问题 已有11人参与

跑SDS-PAGE之前,蛋白要进行变性,但在之前的一些步骤中，（如若采取超声破碎，）都要防止蛋白变性，为什么？谢谢大家！
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1楼 2010-05-17 21:37:47
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
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木有吧，超声你说的是冰浴？那个是怕蛋白酶
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2楼2010-05-17 21:39:53
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zhjun84

铜虫 (初入文坛)
★
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跑SDS-PAGE之前,蛋白要进行变性,但在之前的一些步骤中，（如若采取超声破碎，）都要防止蛋白变性，为什么？谢谢大家


前面主要是分离蛋白，后面跑胶 需要 和sds结合
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3楼2010-05-17 22:04:27
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师
电泳目的首先要搞清楚！！！电泳一般来说是为了坚定实验结果，所以即使蛋白质变形了也没事，但是你要提取纯化蛋白质那就不一样了！！！大多数情况下电泳只是一种检测、坚定的手段！所以会不一样！！！
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大家共同交流、共同提高！！！
4楼2010-05-17 23:28:32
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小白兄

金虫 (小有名气)
超声怕蛋白变性是怕弄错蛋白的可溶解性。sds跑胶前的变性是为了使蛋白解聚
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时光如流水，匆匆而过。
5楼2010-05-17 23:43:39
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jskyp

木虫 (小有名气)

助理研究员
★
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蛋白变性是必须的，前提是防止蛋白的降解。
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6楼2010-05-18 00:12:05
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piupme

铜虫 (小有名气)
★
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这个蛋白质变性，SDS浓度有要求吗？
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7楼2010-05-18 00:39:15
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段家一凡

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by fly9081 at 2010-05-17 21:37:47:
跑SDS-PAGE之前,蛋白要进行变性,但在之前的一些步骤中，（如若采取超声破碎，）都要防止蛋白变性，为什么？谢谢大家！

超声破壁会产生热量，如果不冰浴的话，就会变性，如果你只是看看蛋白有无表达，变不变性就无所谓了，但如果你需要有活性的蛋白，变性就不行了。
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8楼2010-05-18 00:40:33
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
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9楼2010-05-18 01:19:47
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haoxiaoyu380

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by 彬心玉壶 at 2010-05-18 01:19:47:
SDS-PAGE的目的只是检测有没有你的目的蛋白,
并不是所有的蛋白都拿去跑SDS-PAGE了, 只是去了很少的一部分,例如10ul之类，

而前面提蛋白保持低温就是为了减少蛋白被降解的速度， 保证有更多的目的蛋白或者更高 ...

同意上述。跑胶只用了极少一点变性也没关系啊，反正跑过胶的蛋白又不回收。验证后再测其他性能就用不变性的呗
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Enjoyyourself!Enjoyeveryday~~
10楼2010-05-18 07:36:15
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