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rsgd1990

银虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE求教!!!!!!!

SDS-PAGE时,蛋白要煮样,煮样的作用是什么?还有我煮完样后,离心,上样时,总是很粘稠,一团团的,总是粘在枪头上,不好加样。我稀释后,效果好一点了,但是由于浓度太低,跑出来的带很淡,请问该怎么办呢?
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励应助! 2011-12-05 10:04:46
使蛋白充分变性,粘稠的话,楼主可以适当减少上样量,浓度低的话,可以加大上样体积。
jiayoubashaonian
2楼2011-12-04 15:08:44
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imyting

至尊木虫 (正式写手)


amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-12-04 18:52:21
你制样的不是蛋白溶液吧?蛋白溶液不会出现这种情况的,我估计可能是菌体或超声沉淀,由于含有大量细胞壁残留所以会成团。楼上的方法基本可解决这种问题。
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
3楼2011-12-04 15:25:02
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rsgd1990

银虫 (初入文坛)

我是菌体用PBS重悬后,加buffer,煮样,离心,上样。很粘稠,一吸就出来一团,黏在一起,无法控制上样量。不过我超声波破细胞后,就不粘稠了,不知怎么搞的
4楼2011-12-04 19:10:20
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hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by rsgd1990 at 2011-12-04 19:10:20:
我是菌体用PBS重悬后,加buffer,煮样,离心,上样。很粘稠,一吸就出来一团,黏在一起,无法控制上样量。不过我超声波破细胞后,就不粘稠了,不知怎么搞的

煮样煮的不够,煮时间长一点就没这个问题了
scienceguy
5楼2011-12-04 23:24:28
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励应助! 2011-12-05 10:05:11
煮的时间长一点应该不能解决问题,最好是多制点样,把絮状物挑出,用剩下的液体上样。
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
6楼2011-12-05 09:26:51
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erythraea

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

煮的目的是蛋白变性,一般不会出现这种情况的啊!你可以低速离一下
加油,为了更好。。
7楼2011-12-05 10:02:21
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rsgd1990

银虫 (初入文坛)

絮状物是什么呢
8楼2011-12-05 18:05:52
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带你看大海

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

煮的样粘稠很可能是水分蒸发到盖子上了吧,loading buffer的成分是甘油和SDS,容易粘稠的。。。。。。。煮完之后离下心
9楼2011-12-06 14:15:03
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