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rsgd1990

银虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE求教！！！！！！！

SDS-PAGE时，蛋白要煮样，煮样的作用是什么？还有我煮完样后，离心，上样时，总是很粘稠，一团团的，总是粘在枪头上，不好加样。我稀释后，效果好一点了，但是由于浓度太低，跑出来的带很淡，请问该怎么办呢？
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1楼 2011-12-04 14:56:13
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励应助！ 2011-12-05 10:04:46
使蛋白充分变性，粘稠的话，楼主可以适当减少上样量，浓度低的话，可以加大上样体积。
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jiayoubashaonian
2楼2011-12-04 15:08:44
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imyting

至尊木虫 (正式写手)
★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-12-04 18:52:21
你制样的不是蛋白溶液吧？蛋白溶液不会出现这种情况的，我估计可能是菌体或超声沉淀，由于含有大量细胞壁残留所以会成团。楼上的方法基本可解决这种问题。
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
3楼2011-12-04 15:25:02
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rsgd1990

银虫 (初入文坛)
我是菌体用PBS重悬后，加buffer，煮样，离心，上样。很粘稠，一吸就出来一团，黏在一起，无法控制上样量。不过我超声波破细胞后，就不粘稠了，不知怎么搞的
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4楼2011-12-04 19:10:20
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hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by rsgd1990 at 2011-12-04 19:10:20:
我是菌体用PBS重悬后，加buffer，煮样，离心，上样。很粘稠，一吸就出来一团，黏在一起，无法控制上样量。不过我超声波破细胞后，就不粘稠了，不知怎么搞的

煮样煮的不够，煮时间长一点就没这个问题了
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scienceguy
5楼2011-12-04 23:24:28
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励应助！ 2011-12-05 10:05:11
煮的时间长一点应该不能解决问题，最好是多制点样，把絮状物挑出，用剩下的液体上样。
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
6楼2011-12-05 09:26:51
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erythraea

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

煮的目的是蛋白变性，一般不会出现这种情况的啊！你可以低速离一下
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加油，为了更好。。
7楼2011-12-05 10:02:21
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rsgd1990

银虫 (初入文坛)
絮状物是什么呢
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8楼2011-12-05 18:05:52
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带你看大海

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

煮的样粘稠很可能是水分蒸发到盖子上了吧，loading buffer的成分是甘油和SDS，容易粘稠的。。。。。。。煮完之后离下心
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9楼2011-12-06 14:15:03
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