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求教过柱后，酶标仪的使用和酶标板，SDS-PAGE染色
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小虫第一次做蛋白提纯，又没人带，一路坎坷，最近准备过柱了，有许多不明白，请教各路高手。 1.过柱后所有的流穿液和洗脱液，怎么收集，每1mL收集到一个离心管中吗？ 2.确定蛋白的洗脱峰，怎么做？（将收集到的每mL样品，用酶标仪测OD ，再用软件做曲线吗？） 3.如果是用酶标仪测定样品的OD ，用多少nm的光源，用多少孔德酶标板，酶标板的工作体积是多少？  在此先感谢帮助小虫的各路达人了！！！SDS-PAGE电泳后的 胶片，染色时，胶片还没缩小，脱色后，缩小了30%左右 而且蛋白条带不清楚，底色较重，请大家帮忙分析下 染色液：2.5g R-250 500mL甲醇，100mL冰醋酸，400mL 水 脱色液：500mL甲醇，100mL冰醋酸，400mL 水 染色：100mL染色4H 脱色：2片胶 500mL 过夜 |
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西瓜
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2楼2011-09-27 14:05:05
3楼2011-09-27 16:09:35
eileen8519
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eileen8519
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6楼2011-09-27 21:55:55
马上去试！7楼2011-09-28 08:40:15
【答案】应助回帖
★ ★ ★
nmgdwg(金币+5): 2011-09-28 09:29:51
wanhscn(金币+3): Good！欢迎常来分子生物版！ 2011-09-28 10:18:20
nmgdwg(金币+5): 2011-09-28 09:29:51
wanhscn(金币+3): Good！欢迎常来分子生物版！ 2011-09-28 10:18:20
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第一个问题，如果连仪器连着电脑，可以在电脑上面看到峰值，如果没有，下面放一自动收集器，过一段时间去测一下，用OD280，如果OD＞1，开始收集。 第二个问题，如果没有连电脑，只能那么做了，收集一管测一管，麻烦。把峰值的单独流出来，加入千分之一还是万分之一浓度（忘了）的硫柳汞，负40或者80度保存。 第三个问题，看你一次测多少，酶标板的类型多了去了，而且看你酶标仪的型号，有的仪器只能测某种规格的酶标板，一般用96孔板。0D490 |
8楼2011-09-28 09:01:08
9楼2011-09-28 09:14:22
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-09-30 07:46:18
nmgdwg(金币+40): 5 2011-09-30 13:27:29
wanhscn(金币+1, MolEPI+1): 根据回帖，授予一个专家指数。欢迎常来分子生物！ 2011-09-30 15:52:42
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wanhscn(金币+1, MolEPI+1): 根据回帖，授予一个专家指数。欢迎常来分子生物！ 2011-09-30 15:52:42
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你用的是多大规格的柱子，亲和层析柱还是分子筛层析？如果小柱子的话，从上样到出峰的时间会短点，第一次你做的时候就估计一下时间，下几次就不用这么瞎计算时间了，刚开始用OD280测，等到洗脱液的OD280大于1的时候，开始收集，然后分别测OD280，OD260，一般用公式，OD280*1.45-OD260*0.74，就是蛋白浓度。 |
10楼2011-09-29 21:54:26
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