应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求教过柱后，酶标仪的使用和酶标板，SDS-PAGE染色
231/3返回列表123下一页
查看: 3245  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

nmgdwg

银虫 (小有名气)

[求助] 求教过柱后，酶标仪的使用和酶标板，SDS-PAGE染色

小虫第一次做蛋白提纯，又没人带，一路坎坷，最近准备过柱了，有许多不明白，请教各路高手。
1.过柱后所有的流穿液和洗脱液，怎么收集，每1mL收集到一个离心管中吗？
2.确定蛋白的洗脱峰，怎么做？（将收集到的每mL样品，用酶标仪测OD ，再用软件做曲线吗？）
3.如果是用酶标仪测定样品的OD ，用多少nm的光源，用多少孔德酶标板，酶标板的工作体积是多少？
在此先感谢帮助小虫的各路达人了！！！
SDS-PAGE电泳后的 胶片，染色时，胶片还没缩小，脱色后，缩小了30%左右
而且蛋白条带不清楚，底色较重，请大家帮忙分析下
染色液：2.5g R-250 500mL甲醇，100mL冰醋酸，400mL 水
脱色液：500mL甲醇，100mL冰醋酸，400mL 水
染色：100mL染色4H
脱色：2片胶 500mL 过夜
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

Biological 学习园地 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-09-27 11:14:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
没做过，帮顶下
回复此楼
2楼2011-09-27 14:05:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmgdwg

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-09-27 14:05:05:
没做过，帮顶下

谢谢，版主~请教蛋白过完柱子后，要怎么做呢，怎么才能知道那个是你要的东西啊？
赞一下 回复此楼
3楼2011-09-27 16:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eileen8519

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助。 2011-09-27 20:07:28
nmgdwg(金币+5): 2011-09-28 09:29:36
SDS-PAGE电泳
染色液：1g R-250，450ml乙醇，100ml冰醋酸，450ml水
染色15分钟就可以了，脱色直接用纯水，微波炉加热5min，效果挺好的，条带也清楚。不用像楼主那样染色4h，过夜脱色，很浪费时间。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-09-27 16:52:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmgdwg

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by eileen8519 at 2011-09-27 16:52:06:
SDS-PAGE电泳
染色液：1g R-250，450ml乙醇，100ml冰醋酸，450ml水
染色15分钟就可以了，脱色直接用纯水，微波炉加热5min，效果挺好的，条带也清楚。不用像楼主那样染色4h，过夜脱色，很浪费时间。

感谢4楼，明试试去，染色脱色都要微波加热5MIN吗？
赞一下 回复此楼
5楼2011-09-27 18:40:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eileen8519

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-28 07:23:46
引用回帖:
5楼: Originally posted by nmgdwg at 2011-09-27 18:40:33:
感谢4楼，明试试去，染色脱色都要微波加热5MIN吗？

染色不需要加热，加入少许染色液，把胶淹没就可以，然后放在摇床上震荡，这样染色均匀快速，差不多15min。脱色的时候，把染液倒掉，用纯水多冲洗几次，然后到加入一定量的纯水，比染液多一倍，反正也是淹没胶为止，大概小功率微波炉加热5min就可以了，如果脱色不完全，你换一次纯净水再加热2min，效果挺好的。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-09-27 21:55:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmgdwg

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by eileen8519 at 2011-09-27 21:55:55:
染色不需要加热，加入少许染色液，把胶淹没就可以，然后放在摇床上震荡，这样染色均匀快速，差不多15min。脱色的时候，把染液倒掉，用纯水多冲洗几次，然后到加入一定量的纯水，比染液多一倍，反正也是淹没胶为止 ...

马上去试！
之前买过公司的快速考马斯亮蓝染色液，每步都是加热3-5MIN，但那个染色效果不是很好
赞一下 回复此楼
7楼2011-09-28 08:40:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxwb-234

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
nmgdwg(金币+5): 2011-09-28 09:29:51
wanhscn(金币+3): Good！欢迎常来分子生物版！ 2011-09-28 10:18:20
第一个问题，如果连仪器连着电脑，可以在电脑上面看到峰值，如果没有，下面放一自动收集器，过一段时间去测一下，用OD280，如果OD＞1，开始收集。
第二个问题，如果没有连电脑，只能那么做了，收集一管测一管，麻烦。把峰值的单独流出来，加入千分之一还是万分之一浓度（忘了）的硫柳汞，负40或者80度保存。
第三个问题，看你一次测多少，酶标板的类型多了去了，而且看你酶标仪的型号，有的仪器只能测某种规格的酶标板，一般用96孔板。0D490
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-09-28 09:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmgdwg

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yxwb-234 at 2011-09-28 09:01:08:
第一个问题，如果连仪器连着电脑，可以在电脑上面看到峰值，如果没有，下面放一自动收集器，过一段时间去测一下，用OD280，如果OD＞1，开始收集。
第二个问题，如果没有连电脑，只能那么做了，收集一管测一管，麻 ...

感谢回复，实验室只有GE 的预装柱，没有任何关于蛋白分离仪器!那只能是:逐份收集流穿液和洗脱液，然后用酶标仪测OD 再做曲线，确定留那几个管子的样品是吗？ 测洗脱液的OD用280还是其他呢？
赞一下 回复此楼
9楼2011-09-28 09:14:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxwb-234

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-09-30 07:46:18
nmgdwg(金币+40): 5 2011-09-30 13:27:29
wanhscn(金币+1, MolEPI+1): 根据回帖，授予一个专家指数。欢迎常来分子生物！ 2011-09-30 15:52:42
引用回帖:
9楼: Originally posted by nmgdwg at 2011-09-28 09:14:22:
感谢回复，实验室只有GE 的预装柱，没有任何关于蛋白分离仪器!那只能是:逐份收集流穿液和洗脱液，然后用酶标仪测OD 再做曲线，确定留那几个管子的样品是吗？ 测洗脱液的OD用280还是其他呢？

你用的是多大规格的柱子，亲和层析柱还是分子筛层析？如果小柱子的话，从上样到出峰的时间会短点，第一次你做的时候就估计一下时间，下几次就不用这么瞎计算时间了，刚开始用OD280测，等到洗脱液的OD280大于1的时候，开始收集，然后分别测OD280，OD260，一般用公式，OD280*1.45-OD260*0.74，就是蛋白浓度。
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2011-09-29 21:54:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nmgdwg 的主题更新
231/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭