| 查看: 3246 | 回复: 22 | |||||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||
[求助]
求教过柱后，酶标仪的使用和酶标板，SDS-PAGE染色
|
|||||
|
小虫第一次做蛋白提纯，又没人带，一路坎坷，最近准备过柱了，有许多不明白，请教各路高手。 1.过柱后所有的流穿液和洗脱液，怎么收集，每1mL收集到一个离心管中吗？ 2.确定蛋白的洗脱峰，怎么做？（将收集到的每mL样品，用酶标仪测OD ，再用软件做曲线吗？） 3.如果是用酶标仪测定样品的OD ，用多少nm的光源，用多少孔德酶标板，酶标板的工作体积是多少？  在此先感谢帮助小虫的各路达人了！！！SDS-PAGE电泳后的 胶片，染色时，胶片还没缩小，脱色后，缩小了30%左右 而且蛋白条带不清楚，底色较重，请大家帮忙分析下 染色液：2.5g R-250 500mL甲醇，100mL冰醋酸，400mL 水 脱色液：500mL甲醇，100mL冰醋酸，400mL 水 染色：100mL染色4H 脱色：2片胶 500mL 过夜 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 Biological | 学习园地 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有200人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求教两个物化概念的问题
已经有19人回复
- 过柱子极性太大用甲醇都淋不下来怎么办？？？
已经有17人回复
- 求agilent的保护柱价格
已经有3人回复
- 非英语国家工作语言为英语的语言证明模板
已经有11人回复
- 同工酶的染色及条带判定
已经有5人回复
- 酶标仪测BSA浓度的方法，不用ELISA法，能经过280nm测量吗？
已经有10人回复
- 没用过酶标仪呢，请问96孔板一般要加多少样品量啊
已经有13人回复
- 酶标仪做生理指标如POD、SOD来测定其OD值
已经有14人回复
- 酶标仪的使用
已经有15人回复
- 用过酶标仪的大侠请进来
已经有13人回复
- （高悬赏求教）SDS-PAGE时间过长,速度慢
已经有5人回复
- 有了解流式细胞仪和酶标仪的么？求助啦~~~
已经有7人回复
- SDS-PAGE电泳，菌液总蛋白，染色后显示的是弥散的
已经有5人回复
- 酶标仪检测的OD值在多少最准
已经有15人回复
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
2楼2011-09-27 14:05:05
3楼2011-09-27 16:09:35
eileen8519
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1420.4
- 散金: 18
- 红花: 1
- 帖子: 243
- 在线: 75.6小时
- 虫号: 802150
- 注册: 2009-07-02
- 性别: MM
- 专业: 免疫生物学
4楼2011-09-27 16:52:06
5楼2011-09-27 18:40:33
eileen8519
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1420.4
- 散金: 18
- 红花: 1
- 帖子: 243
- 在线: 75.6小时
- 虫号: 802150
- 注册: 2009-07-02
- 性别: MM
- 专业: 免疫生物学
6楼2011-09-27 21:55:55
马上去试！7楼2011-09-28 08:40:15
【答案】应助回帖
★ ★ ★
nmgdwg(金币+5): 2011-09-28 09:29:51
wanhscn(金币+3): Good！欢迎常来分子生物版！ 2011-09-28 10:18:20
nmgdwg(金币+5): 2011-09-28 09:29:51
wanhscn(金币+3): Good！欢迎常来分子生物版！ 2011-09-28 10:18:20
|
第一个问题，如果连仪器连着电脑，可以在电脑上面看到峰值，如果没有，下面放一自动收集器，过一段时间去测一下，用OD280，如果OD＞1，开始收集。 第二个问题，如果没有连电脑，只能那么做了，收集一管测一管，麻烦。把峰值的单独流出来，加入千分之一还是万分之一浓度（忘了）的硫柳汞，负40或者80度保存。 第三个问题，看你一次测多少，酶标板的类型多了去了，而且看你酶标仪的型号，有的仪器只能测某种规格的酶标板，一般用96孔板。0D490 |
8楼2011-09-28 09:01:08
9楼2011-09-28 09:14:22
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-09-30 07:46:18
nmgdwg(金币+40): 5 2011-09-30 13:27:29
wanhscn(金币+1, MolEPI+1): 根据回帖，授予一个专家指数。欢迎常来分子生物！ 2011-09-30 15:52:42
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-09-30 07:46:18
nmgdwg(金币+40): 5 2011-09-30 13:27:29
wanhscn(金币+1, MolEPI+1): 根据回帖，授予一个专家指数。欢迎常来分子生物！ 2011-09-30 15:52:42
|
你用的是多大规格的柱子，亲和层析柱还是分子筛层析？如果小柱子的话，从上样到出峰的时间会短点，第一次你做的时候就估计一下时间，下几次就不用这么瞎计算时间了，刚开始用OD280测，等到洗脱液的OD280大于1的时候，开始收集，然后分别测OD280，OD260，一般用公式，OD280*1.45-OD260*0.74，就是蛋白浓度。 |
10楼2011-09-29 21:54:26
