应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求教过柱后，酶标仪的使用和酶标板，SDS-PAGE染色
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2773  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

nmgdwg

银虫 (小有名气)

[求助] 求教过柱后，酶标仪的使用和酶标板，SDS-PAGE染色

小虫第一次做蛋白提纯，又没人带，一路坎坷，最近准备过柱了，有许多不明白，请教各路高手。
1.过柱后所有的流穿液和洗脱液，怎么收集，每1mL收集到一个离心管中吗？
2.确定蛋白的洗脱峰，怎么做？（将收集到的每mL样品，用酶标仪测OD ，再用软件做曲线吗？）
3.如果是用酶标仪测定样品的OD ，用多少nm的光源，用多少孔德酶标板，酶标板的工作体积是多少？
在此先感谢帮助小虫的各路达人了！！！
SDS-PAGE电泳后的 胶片，染色时，胶片还没缩小，脱色后，缩小了30%左右
而且蛋白条带不清楚，底色较重，请大家帮忙分析下
染色液：2.5g R-250 500mL甲醇，100mL冰醋酸，400mL 水
脱色液：500mL甲醇，100mL冰醋酸，400mL 水
染色：100mL染色4H
脱色：2片胶 500mL 过夜
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

Biological 学习园地 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-09-27 11:14:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eileen8519

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助。 2011-09-27 20:07:28
nmgdwg(金币+5): 2011-09-28 09:29:36
SDS-PAGE电泳
染色液：1g R-250，450ml乙醇，100ml冰醋酸，450ml水
染色15分钟就可以了，脱色直接用纯水，微波炉加热5min，效果挺好的，条带也清楚。不用像楼主那样染色4h，过夜脱色，很浪费时间。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-09-27 16:52:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

nmgdwg

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-09-27 14:05:05:
没做过，帮顶下

谢谢，版主~请教蛋白过完柱子后，要怎么做呢，怎么才能知道那个是你要的东西啊？
赞一下 回复此楼
3楼2011-09-27 16:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmgdwg

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by eileen8519 at 2011-09-27 16:52:06:
SDS-PAGE电泳
染色液：1g R-250，450ml乙醇，100ml冰醋酸，450ml水
染色15分钟就可以了，脱色直接用纯水，微波炉加热5min，效果挺好的，条带也清楚。不用像楼主那样染色4h，过夜脱色，很浪费时间。

感谢4楼，明试试去，染色脱色都要微波加热5MIN吗？
赞一下 回复此楼
5楼2011-09-27 18:40:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eileen8519

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-28 07:23:46
引用回帖:
5楼: Originally posted by nmgdwg at 2011-09-27 18:40:33:
感谢4楼，明试试去，染色脱色都要微波加热5MIN吗？

染色不需要加热，加入少许染色液，把胶淹没就可以，然后放在摇床上震荡，这样染色均匀快速，差不多15min。脱色的时候，把染液倒掉，用纯水多冲洗几次，然后到加入一定量的纯水，比染液多一倍，反正也是淹没胶为止，大概小功率微波炉加热5min就可以了，如果脱色不完全，你换一次纯净水再加热2min，效果挺好的。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-09-27 21:55:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +15 荷包蛋hyj 2026-03-26 15/750 2026-03-28 04:13 by fmesaito
[考研] 085602 307分 求调剂 +6 不知道叫什么！ 2026-03-26 6/300 2026-03-27 22:00 by 催化大白
[考研] 学硕274求调剂 +5 Li李鱼 2026-03-26 5/250 2026-03-27 20:51 by 热情沙漠
[考研] 292求调剂 +13 鹅鹅鹅额额额额� 2026-03-25 14/700 2026-03-27 15:40 by caszguilin
[考研] 一志愿211，335分，0856，求调剂院校和导师 +4 倾____萧 2026-03-27 5/250 2026-03-27 11:52 by zhshch
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 一志愿郑大085600，310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 一志愿郑州大学，080500学硕，总分317分求调剂 +4 举个栗子oi 2026-03-24 5/250 2026-03-26 23:15 by 不吃魚的貓
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 271求调剂 +6 生如夏花… 2026-03-22 6/300 2026-03-26 16:48 by 张凯十八号
[考研] 352求调剂 +4 大米饭！ 2026-03-22 4/200 2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭