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求教过柱后，酶标仪的使用和酶标板，SDS-PAGE染色
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小虫第一次做蛋白提纯，又没人带，一路坎坷，最近准备过柱了，有许多不明白，请教各路高手。 1.过柱后所有的流穿液和洗脱液，怎么收集，每1mL收集到一个离心管中吗？ 2.确定蛋白的洗脱峰，怎么做？（将收集到的每mL样品，用酶标仪测OD ，再用软件做曲线吗？） 3.如果是用酶标仪测定样品的OD ，用多少nm的光源，用多少孔德酶标板，酶标板的工作体积是多少？  在此先感谢帮助小虫的各路达人了！！！SDS-PAGE电泳后的 胶片，染色时，胶片还没缩小，脱色后，缩小了30%左右 而且蛋白条带不清楚，底色较重，请大家帮忙分析下 染色液：2.5g R-250 500mL甲醇，100mL冰醋酸，400mL 水 脱色液：500mL甲醇，100mL冰醋酸，400mL 水 染色：100mL染色4H 脱色：2片胶 500mL 过夜 |
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
nmgdwg(金币+5): 2011-09-28 09:29:51
wanhscn(金币+3): Good！欢迎常来分子生物版！ 2011-09-28 10:18:20
nmgdwg(金币+5): 2011-09-28 09:29:51
wanhscn(金币+3): Good！欢迎常来分子生物版！ 2011-09-28 10:18:20
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第一个问题，如果连仪器连着电脑，可以在电脑上面看到峰值，如果没有，下面放一自动收集器，过一段时间去测一下，用OD280，如果OD＞1，开始收集。 第二个问题，如果没有连电脑，只能那么做了，收集一管测一管，麻烦。把峰值的单独流出来，加入千分之一还是万分之一浓度（忘了）的硫柳汞，负40或者80度保存。 第三个问题，看你一次测多少，酶标板的类型多了去了，而且看你酶标仪的型号，有的仪器只能测某种规格的酶标板，一般用96孔板。0D490 |
8楼2011-09-28 09:01:08
3楼2011-09-27 16:09:35
eileen8519
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
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- 在线: 75.6小时
- 虫号: 802150
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- 性别: MM
- 专业: 免疫生物学
4楼2011-09-27 16:52:06
5楼2011-09-27 18:40:33
