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阿山来了

铁虫 (初入文坛)

[求助] 我的蛋白跑胶图没什么条带 求助大神帮忙

是不是样品没处理好,跑的是提取的米渣蛋白

IMG_0017.JPG
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖应助 2013-03-29 09:38:50
是SDS-PAGE吗?上样量是多少?感觉可能是样品没有变性好。
2楼2013-03-27 22:58:30
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阿山来了

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-27 22:58:30
是SDS-PAGE吗?上样量是多少?感觉可能是样品没有变性好。

是sds  上样量10ul  我用的2x样品上样液20ul和提取谷蛋白  水浴加热5-10min 可能没怎么离心。
3楼2013-03-28 10:33:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖应助 2013-03-29 09:38:56
引用回帖:
3楼: Originally posted by 阿山来了 at 2013-03-28 10:33:14
是sds  上样量10ul  我用的2x样品上样液20ul和提取谷蛋白  水浴加热5-10min 可能没怎么离心。...

样品浓度?我问的是大致上了多少μg蛋白。主要看看是不是在考染的灵敏度范围。最右边的是marker吗?为什么会有一条在浓缩胶里面?是不是胶配置的比例不对?此外,样品上样前最好离心,以免堵塞胶孔。
4楼2013-03-28 12:29:44
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阿山来了

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-28 12:29:44
样品浓度?我问的是大致上了多少μg蛋白。主要看看是不是在考染的灵敏度范围。最右边的是marker吗?为什么会有一条在浓缩胶里面?是不是胶配置的比例不对?此外,样品上样前最好离心,以免堵塞胶孔。...

最右边是marker 不知道为什么在浓缩胶里?  我感觉我样品溶解的不好。是12%分离胶,5%浓缩胶!郁闷啊!样品配成10mg/ml(样品没怎么溶解,有颗粒状) 然后从中吸取50ul和2x上样缓冲液50ul混合,水浴加热5-10min!
5楼2013-03-28 21:00:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 阿山来了 at 2013-03-28 21:00:42
最右边是marker 不知道为什么在浓缩胶里?  我感觉我样品溶解的不好。是12%分离胶,5%浓缩胶!郁闷啊!样品配成10mg/ml(样品没怎么溶解,有颗粒状) 然后从中吸取50ul和2x上样缓冲液50ul混合,水浴加热5-10min!...

你做的是标准蛋白吗?是样品蛋白的性质问题?
6楼2013-03-28 23:50:33
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544534326

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
以前我也做过类似实验,用的是大米蛋白,里面大部分是谷蛋白,不溶于水的,电泳时要求上样缓冲液中都是可溶的,就是说样品处理后上样前是不存在颗粒等,
另外就是如果溶解了,那就是浓缩胶有问题的
人活着就要保持一种劳作的状态!
7楼2013-03-29 12:27:28
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tianchi2952

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蛋白处理的有问题,浓度太低......
益学善用
8楼2013-03-29 13:12:51
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阿山来了

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 544534326 at 2013-03-29 12:27:28
以前我也做过类似实验,用的是大米蛋白,里面大部分是谷蛋白,不溶于水的,电泳时要求上样缓冲液中都是可溶的,就是说样品处理后上样前是不存在颗粒等,
另外就是如果溶解了,那就是浓缩胶有问题的

你好,请问你是怎么让蛋白溶解的呢?我估计我失败的原因是蛋白溶解不够!
9楼2013-03-31 14:44:24
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细雨润心

铜虫 (小有名气)

楼主找到失败的原因和解决方法没有,晚辈求教
生命不息,奋斗不止
10楼2015-10-27 22:17:30
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