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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 我的蛋白跑胶图没什么条带 求助大神帮忙
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阿山来了

铁虫 (初入文坛)

[求助] 我的蛋白跑胶图没什么条带 求助大神帮忙

是不是样品没处理好，跑的是提取的米渣蛋白

IMG_0017.JPG
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1楼 2013-03-27 22:39:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖应助 2013-03-29 09:38:50
是SDS-PAGE吗？上样量是多少？感觉可能是样品没有变性好。
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2楼2013-03-27 22:58:30
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阿山来了

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-27 22:58:30
是SDS-PAGE吗？上样量是多少？感觉可能是样品没有变性好。

是sds  上样量10ul  我用的2x样品上样液20ul和提取谷蛋白  水浴加热5-10min 可能没怎么离心。
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3楼2013-03-28 10:33:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖应助 2013-03-29 09:38:56
引用回帖:
3楼: Originally posted by 阿山来了 at 2013-03-28 10:33:14
是sds  上样量10ul  我用的2x样品上样液20ul和提取谷蛋白  水浴加热5-10min 可能没怎么离心。...

样品浓度？我问的是大致上了多少μg蛋白。主要看看是不是在考染的灵敏度范围。最右边的是marker吗？为什么会有一条在浓缩胶里面？是不是胶配置的比例不对？此外，样品上样前最好离心，以免堵塞胶孔。
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4楼2013-03-28 12:29:44
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阿山来了

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-28 12:29:44
样品浓度？我问的是大致上了多少μg蛋白。主要看看是不是在考染的灵敏度范围。最右边的是marker吗？为什么会有一条在浓缩胶里面？是不是胶配置的比例不对？此外，样品上样前最好离心，以免堵塞胶孔。...

最右边是marker 不知道为什么在浓缩胶里？  我感觉我样品溶解的不好。是12%分离胶，5%浓缩胶！郁闷啊！样品配成10mg/ml(样品没怎么溶解，有颗粒状） 然后从中吸取50ul和2x上样缓冲液50ul混合，水浴加热5-10min!
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5楼2013-03-28 21:00:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 阿山来了 at 2013-03-28 21:00:42
最右边是marker 不知道为什么在浓缩胶里？  我感觉我样品溶解的不好。是12%分离胶，5%浓缩胶！郁闷啊！样品配成10mg/ml(样品没怎么溶解，有颗粒状） 然后从中吸取50ul和2x上样缓冲液50ul混合，水浴加热5-10min!...

你做的是标准蛋白吗？是样品蛋白的性质问题？
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6楼2013-03-28 23:50:33
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544534326

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以前我也做过类似实验，用的是大米蛋白，里面大部分是谷蛋白，不溶于水的，电泳时要求上样缓冲液中都是可溶的，就是说样品处理后上样前是不存在颗粒等，
另外就是如果溶解了，那就是浓缩胶有问题的
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人活着就要保持一种劳作的状态！
7楼2013-03-29 12:27:28
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tianchi2952

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白处理的有问题，浓度太低......
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益学善用
8楼2013-03-29 13:12:51
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阿山来了

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 544534326 at 2013-03-29 12:27:28
以前我也做过类似实验，用的是大米蛋白，里面大部分是谷蛋白，不溶于水的，电泳时要求上样缓冲液中都是可溶的，就是说样品处理后上样前是不存在颗粒等，
另外就是如果溶解了，那就是浓缩胶有问题的

你好，请问你是怎么让蛋白溶解的呢？我估计我失败的原因是蛋白溶解不够！
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9楼2013-03-31 14:44:24
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细雨润心

铜虫 (小有名气)
楼主找到失败的原因和解决方法没有，晚辈求教
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生命不息，奋斗不止
10楼2015-10-27 22:17:30
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