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求助：植物蛋白SDS-PAGE跑胶问题
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求助各位老师同学~ 做植物蛋白的SDS-PAGE，胶跑的特别慢，上次跑了7个多小时还没跑到底，这次又很慢，平均一小时能跑不到1cm的样子，请教各位这样正常么？有可能是啥原因啊？上样前加loading buffer煮5min，配胶用的是碧云天的SDS-PAGE凝胶配置试剂盒，产品编号P0012A。 小女纸这厢有礼了~ |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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2楼2012-06-06 08:49:14
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【答案】应助回帖
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SDS电泳太慢的改进措施 建议改进措施: 1.可以适当进一步地拉开浓缩胶和分离胶之间的pH值，比如浓缩胶为pH=6.6，分离胶为pH=8.9。 2.可以考虑加高电泳时，浓缩胶的电压为90-100 V，分离胶的电压到120V-200V，；浓缩胶和分离胶有时候可能都设成150 V也能电泳成功。 3.使用全新配置的缓冲溶液，以利于蛋白质样品的充分溶解。 4.适当该种胶浓度下使用分离效果明显的Marker。 5.保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。 6.适当调整聚丙烯酰胺的凝胶浓度。 7. 聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝胶的分辨率。建议做法：待凝胶在室温凝固后，可在室温下放置一段时间使用。忌即配即用或4度冰箱放置，前者易导致凝固不充分，后者可导致SDS结晶。一般凝胶可在室温下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。 8.分离胶的浓度应高于浓缩胶，但是胶浓度高会引起电泳时间变长，电泳时间会引起电泳带弥散。具体的参考的凝胶浓度参见附录。 5 36—200 7.5 24—200 10 14—200 12.5 14—100 15 14—60 浓缩胶浓度低；分离胶浓度高于浓缩胶，一般不小于5%。 2KD的蛋白质必须要用Tricine胶系统，上面说的改进对于分子量低于3KD的蛋白质的电泳没有用，但是对于高于3KD的蛋白质的电泳有用。 |
8楼2013-10-07 22:11:15
9楼2013-10-08 10:45:46