| 查看: 2217 | 回复: 8 | ||||
[求助]
求助：植物蛋白SDS-PAGE跑胶问题
|
|
求助各位老师同学~ 做植物蛋白的SDS-PAGE，胶跑的特别慢，上次跑了7个多小时还没跑到底，这次又很慢，平均一小时能跑不到1cm的样子，请教各位这样正常么？有可能是啥原因啊？上样前加loading buffer煮5min，配胶用的是碧云天的SDS-PAGE凝胶配置试剂盒，产品编号P0012A。 小女纸这厢有礼了~ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有196人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 跑植物叶片蛋白的双向电泳 需要点Mark吗 多大分子量的啊 还有 多大的胶条可以啊
已经有22人回复
- SDS聚丙烯酰胺蛋白电泳 上样时蛋白样品从孔中飘出
已经有29人回复
- SDS-PAGE胶的问题
已经有9人回复
- sds-page跑胶时间太长，时间也有问题
已经有7人回复
- SDS-PAGE 蛋白胶跑胶问题
已经有27人回复
- 请大家帮忙分析下我的SDS-PAGE蛋白检测胶啊
已经有26人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE电泳分离胶和浓缩胶浓度问题
已经有11人回复
- 急 跑胶求助（sds-page）
已经有7人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题
已经有38人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE跑不出带
已经有26人回复
- 【求助/交流】请教，SDS-PAGE的问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE有可能看到蛋白二聚体吗？
已经有15人回复
2楼2012-06-06 08:49:14
3楼2012-06-06 10:50:46
4楼2012-06-08 10:00:07
5楼2012-06-08 11:30:02
6楼2012-06-08 12:47:13
7楼2013-10-07 19:34:32
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
|
SDS电泳太慢的改进措施 建议改进措施: 1.可以适当进一步地拉开浓缩胶和分离胶之间的pH值，比如浓缩胶为pH=6.6，分离胶为pH=8.9。 2.可以考虑加高电泳时，浓缩胶的电压为90-100 V，分离胶的电压到120V-200V，；浓缩胶和分离胶有时候可能都设成150 V也能电泳成功。 3.使用全新配置的缓冲溶液，以利于蛋白质样品的充分溶解。 4.适当该种胶浓度下使用分离效果明显的Marker。 5.保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。 6.适当调整聚丙烯酰胺的凝胶浓度。 7. 聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝胶的分辨率。建议做法：待凝胶在室温凝固后，可在室温下放置一段时间使用。忌即配即用或4度冰箱放置，前者易导致凝固不充分，后者可导致SDS结晶。一般凝胶可在室温下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。 8.分离胶的浓度应高于浓缩胶，但是胶浓度高会引起电泳时间变长，电泳时间会引起电泳带弥散。具体的参考的凝胶浓度参见附录。 5 36—200 7.5 24—200 10 14—200 12.5 14—100 15 14—60 浓缩胶浓度低；分离胶浓度高于浓缩胶，一般不小于5%。 2KD的蛋白质必须要用Tricine胶系统，上面说的改进对于分子量低于3KD的蛋白质的电泳没有用，但是对于高于3KD的蛋白质的电泳有用。 |
8楼2013-10-07 22:11:15
9楼2013-10-08 10:45:46
