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樱桃敏敏

铜虫 (小有名气)

[交流] 跑植物叶片蛋白的双向电泳 需要点Mark吗 多大分子量的啊 还有 多大的胶条可以啊

要做植物叶片的双向电泳 不知道跑二向的时候要不要一定要点Mark 呢 求各位高手指教 以及选多大长度的胶条可以啊 有没有 跑这个电泳的 给个配胶的配方好不
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1楼 2012-05-09 09:40:21
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boyuanbio

捐助贵宾 (初入文坛)
★
樱桃敏敏(金币+1): 谢谢参与
如果你想知道蛋白分布的分子量情况的话可以加Mark，如果的目的是进行差异比较，后续做质谱鉴定的话，就可以不加的，胶条的长度选择是根据你所要分离的蛋白的决定的，我们一般选择24cm的，用12%的分离胶
12%的凝胶（每块胶约65ml，做一次凝胶需要浪费的体积大约是30ml）
试剂        160 ml（2块）        225 ml（3块）        290 ml（4块）        355 ml（5块）        420 ml（6块）
30%Acr/Bis（37.5：1）（ml）        64         90        116        142        168
超纯水（ml）        54        76        98        120        142
1.5 M Tris-HCL（pH8.8）（ml）        40        56        72.4        89        105
10% SDS （ml）        1.6        2.3        2.9        3.6        4.2
10%AP（ul）        800        1130        1450        1780        2100
TEMED（ul）        80        113        145        178        210
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21楼2012-08-02 14:40:16
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zero623

荣誉版主 (职业作家)
★
樱桃敏敏(金币+1): 谢谢参与
我来回答你的问题：
1. markers还是需要的，要不然无法确定分离后的蛋白大小范围！条件实验是可以不加，但是最后论文上要用的图最好还是要用！

2. IPG胶条的长度越长越好（主要与后续SDS-PAGE电泳槽兼容），这样不同PH梯度之间隔大有利于聚焦；

3. 2DE的PROTOCOL非常多，建议查阅一些专业书籍，比如Simpson的《Proteins and proteomics: a laboratory manual》!
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7楼2012-05-09 10:10:19
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haixing2008

荣誉版主 (文坛精英)
★
樱桃敏敏(金币+1): 谢谢参与
不懂帮顶！
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8楼2012-05-09 10:19:13
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樱桃敏敏

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zero623 at 2012-05-09 10:10:19:
我来回答你的问题：
1. markers还是需要的，要不然无法确定分离后的蛋白大小范围！条件实验是可以不加，但是最后论文上要用的图最好还是要用！

2. IPG胶条的长度越长越好（主要与后续SDS-PAGE电泳槽兼容），这 ...

好的 非常感谢您 我找找看 呵呵 马上就要做实验了 还得好好找找呢 以后还有问题请假您哦 谢谢您
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20楼2012-05-09 18:41:47
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xiucai_2012

木虫 (小有名气)
★
樱桃敏敏(金币+1): 谢谢参与
我跑单向检测的时候用蛋白质marker，不过跑二向的时候也可以加吗？怎么加？
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23楼2012-12-30 12:44:01
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neu2342楼
2012-05-09 09:54  
樱桃敏敏(金币+1): 谢谢参与
neu2343楼
2012-05-09 09:54  
樱桃敏敏(金币+1): 谢谢参与
neu2344楼
2012-05-09 09:54  
樱桃敏敏(金币+1): 谢谢参与
neu2345楼
2012-05-09 09:54  
樱桃敏敏(金币+1): 谢谢参与
neu2346楼
2012-05-09 09:54  
樱桃敏敏(金币+1): 谢谢参与
yingying15889楼
2012-05-09 10:34  
樱桃敏敏(金币+1): 谢谢参与
yingying158810楼
2012-05-09 10:34  
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yingying158811楼
2012-05-09 10:34  
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yingying158812楼
2012-05-09 10:34  
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yingying158814楼
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yingying158815楼
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tangbohejin16楼
2012-05-09 10:35  
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tangbohejin17楼
2012-05-09 10:38  
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tangbohejin18楼
2012-05-09 10:39  
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tangbohejin19楼
2012-05-09 10:39  
樱桃敏敏(金币+1): 谢谢参与
neu23422楼
2012-08-04 20:21  
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