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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双向电泳，蛋白样品除盐有用透析的吗？好操作吗？
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hrjxx

新虫 (小有名气)

[求助] 双向电泳，蛋白样品除盐有用透析的吗？好操作吗？

我跑双向，提肌肉总蛋白，电压上不去吗，需要除盐，请问下，用什么方法好啊？？透析的话，需要专门的装置吗？？都有些什么部件啊 ？？
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1楼 2011-11-10 18:08:23
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yang0071

木虫 (职业作家)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-11-10 21:07:24
买处理好的透析袋
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2楼2011-11-10 19:00:44
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
hrjxx(金币+2): 你好，冻干再溶解可以除盐吗？？需要冻干机吗？？蛋白好溶解吗？？ 2011-11-11 02:15:04
wanhscn(金币+3): Good！ 2011-11-11 14:17:28
透析袋加透析液，我们做过还原酶的纯化与酶活测定是这样做的，楼主为什么不冻干再溶解呢？
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jiayoubashaonian
3楼2011-11-10 21:56:43
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hrjxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2011-11-10 19:00:44:
买处理好的透析袋

你好，仅买一个透析袋就可以了吗？？处理好是什么意思？？没处理的是需要灭菌吗？
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4楼2011-11-11 02:13:46
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

hrjxx(金币+2): 你好，我用的是TCA/丙酮沉淀法，提肌肉蛋白，用的试剂是三氯醋酸和丙酮，别的不要什么是假 ，这会引入盐离子吗？？是不是器皿上可能带有盐离子呢？？或者说试剂纯度不够？？不过丙酮和三氯乙酸，貌似都是国产的啊，好点试剂公司都不卖这些的 2011-11-14 23:10:49
能说下提取的方法吗？分析一下哪里引入了盐离子。
最好是提取完就上电泳，处理的步骤越多，丢蛋白的情况就越严重，差异点就少，可能有重要的线索会丢掉。
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5楼2011-11-11 13:46:26
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xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以使用2D电泳样品清洁试剂（786-124）
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6楼2011-11-14 21:19:39
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江南

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

透析完冻干，这个效果比较好！想快的话就丙酮沉淀好了
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7楼2011-11-15 08:59:45
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): good!鼓励交流! 2011-11-15 17:18:30
肌肉的蛋白我没提取过，做过肝脏组织的提取，是用裂解液加研磨棒来处理的。丙酮沉淀会丢失相当一部分的蛋白。
2D－clean up试剂盒貌似和丙酮沉淀是一个原理，没用过。
不知道你的样品用裂解液加研磨棒行不行。要是丙酮一直做的很郁闷，不妨试试。
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8楼2011-11-15 12:50:45
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学术茹

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 江南 at 2011-11-15 08:59:45
透析完冻干，这个效果比较好！想快的话就丙酮沉淀好了

为什么要冻干呢？要浓缩体积的话，超滤不就行了。
  我冻干后 再溶于裂解液时，蛋白就不怎么溶，很是麻烦呀
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9楼2013-09-17 10:34:04
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