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hrjxx

新虫 (小有名气)

[交流] 双向电泳，蛋白定量测定用方法的讨论

伯乐的推荐braford法，这个原理是根据考马斯亮蓝结合蛋白形成的复合物在595nm处，形成最高吸收值，可是GE的说明里说，凡是含有chaps，dtt，载体两性电解质等溶液，都不能用以考马斯亮蓝结合蛋白为原理的蛋白定量测定，而双向的样品溶液里，确实含有这几个东西，这个你们都是怎么处理的啊 ？？请大家给予指教啊 ？？？？？
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1楼 2011-09-20 10:27:10
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辉辉集团

银虫 (正式写手)
★
hrjxx(金币+1):谢谢参与
那你就换个蛋白测定的方法好了哦！
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2楼2011-09-20 10:52:43
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
hrjxx(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+1): good 2011-09-20 18:02:21
可以用紫外吸收测定 280nm吸收 确定浓度！
不含发光氨基酸的除外了！
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3楼2011-09-20 17:22:23
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hf2016

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
hrjxx(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+3): good 2011-09-21 12:26:26
我们也是用的GE 的系统，的确是有一定影响的，这个我曾经用新制的水化液与pbs比较过，相差挺大的，当时工程师来的时候还是用的bradford方法，如果都是采用的相同方法，一定程度上还是可以抵消误差的我觉得，如果还是觉得不保险的话，换个方法也成啊。好多事用的BCA方法定量的
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4楼2011-09-21 09:12:22
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hrjxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hf2016 at 2011-09-21 09:12:22:
我们也是用的GE 的系统，的确是有一定影响的，这个我曾经用新制的水化液与pbs比较过，相差挺大的，当时工程师来的时候还是用的bradford方法，如果都是采用的相同方法，一定程度上还是可以抵消误差的我觉得，如果还 ...

bca方法好像更为不妥啊，里面的DTT是还原剂可以还原二价铜离子为一价，增加吸光度啊
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5楼2011-09-21 11:45:40
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hellolin

金虫 (小有名气)
★
hrjxx(金币+1):谢谢参与
hrjxx(金币+1): 这样说也有一定道理啊 2011-09-21 15:39:05
有什么关系吗？你不同的样品都用bradford法测浓度，最后蛋白浓度虽然不是很准，但是可以确保上样量一样不就行了？
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6楼2011-09-21 12:54:33
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小娶个木

木虫 (正式写手)
★
hrjxx(金币+1):谢谢参与
恩  我用的是 酶标仪法 ，简单 准确 ，效果也不错啊  呵呵 我是学磷酸化蛋白质组学的
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7楼2011-09-22 11:19:21
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meirenteng

新虫 (小有名气)
★
hrjxx(金币+1):谢谢参与
我也用的这个方法呢。。
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8楼2011-09-23 10:21:11
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清风寨

银虫 (小有名气)
★
hrjxx(金币+1):谢谢参与
要不测测 总N量试试  这只是个人想法
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9楼2011-09-23 11:02:32
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清泉

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
hrjxx(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-11-27 16:10:07
我用的也是braford法，因为在双向电泳中，测定蛋白浓度在很大程度上主要是确保上样量一致，其实每个方法都存在一定弊端，我认为这个方法还是可行的。
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10楼2011-09-23 23:24:18
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kid0i

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
hrjxx(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2): 是啊 2011-09-30 07:44:58
GE说chaps、两性电解质有干扰，那就麻烦点做个对照，把他们的光吸收都差掉不就得了。再说，粗测蛋白本身就不是很准。
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11楼2011-09-30 00:28:59
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xhjggl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
可以使用非干扰型蛋白浓度测定试剂盒  SK3071
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12楼2011-11-26 21:38:21
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xhjggl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
可以采用非干扰型蛋白浓度测定试剂盒

适合2D提取时总蛋白的定量和包涵体中蛋白的定量。
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13楼2012-02-13 15:44:49
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静默

金虫 (正式写手)
我用的也是braford法
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14楼2012-04-04 16:17:13
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七小艾

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by hrjxx at 2011-09-21 11:45:40
bca方法好像更为不妥啊，里面的DTT是还原剂可以还原二价铜离子为一价，增加吸光度啊...

那如果改成先定量，再加DTT是不是就可以用BCA定量？有文献是先用尿素和CHAPS把制备好的蛋白溶掉，然后用bradford定量，然后再加DTT和IPG Buffer进行水化，如果BCA只受DTT影响，是不是就可以按这个方法先定量后水化？
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15楼2014-08-06 16:27:33
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