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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双向电泳，蛋白定量测定用方法的讨论
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hrjxx

新虫 (小有名气)

[交流] 双向电泳，蛋白定量测定用方法的讨论

伯乐的推荐braford法，这个原理是根据考马斯亮蓝结合蛋白形成的复合物在595nm处，形成最高吸收值，可是GE的说明里说，凡是含有chaps，dtt，载体两性电解质等溶液，都不能用以考马斯亮蓝结合蛋白为原理的蛋白定量测定，而双向的样品溶液里，确实含有这几个东西，这个你们都是怎么处理的啊 ？？请大家给予指教啊 ？？？？？
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1楼 2011-09-20 10:27:10
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七小艾

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by hrjxx at 2011-09-21 11:45:40
bca方法好像更为不妥啊，里面的DTT是还原剂可以还原二价铜离子为一价，增加吸光度啊...

那如果改成先定量，再加DTT是不是就可以用BCA定量？有文献是先用尿素和CHAPS把制备好的蛋白溶掉，然后用bradford定量，然后再加DTT和IPG Buffer进行水化，如果BCA只受DTT影响，是不是就可以按这个方法先定量后水化？
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15楼2014-08-06 16:27:33
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辉辉集团

银虫 (正式写手)
★
hrjxx(金币+1):谢谢参与
那你就换个蛋白测定的方法好了哦！
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2楼2011-09-20 10:52:43
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
hrjxx(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+1): good 2011-09-20 18:02:21
可以用紫外吸收测定 280nm吸收 确定浓度！
不含发光氨基酸的除外了！
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3楼2011-09-20 17:22:23
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hf2016

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
hrjxx(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+3): good 2011-09-21 12:26:26
我们也是用的GE 的系统，的确是有一定影响的，这个我曾经用新制的水化液与pbs比较过，相差挺大的，当时工程师来的时候还是用的bradford方法，如果都是采用的相同方法，一定程度上还是可以抵消误差的我觉得，如果还是觉得不保险的话，换个方法也成啊。好多事用的BCA方法定量的
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4楼2011-09-21 09:12:22
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