[交流] 跑植物叶片蛋白的双向电泳需要点Mark吗多大分子量的啊还有多大的胶条可以啊

要做植物叶片的双向电泳不知道跑二向的时候要不要一定要点Mark 呢求各位高手指教以及选多大长度的胶条可以啊有没有跑这个电泳的给个配胶的配方好不

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1楼 2012-05-09 09:40:21

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zero623

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我来回答你的问题：
1. markers还是需要的，要不然无法确定分离后的蛋白大小范围！条件实验是可以不加，但是最后论文上要用的图最好还是要用！

2. IPG胶条的长度越长越好（主要与后续SDS-PAGE电泳槽兼容），这样不同PH梯度之间隔大有利于聚焦；

3. 2DE的PROTOCOL非常多，建议查阅一些专业书籍，比如Simpson的《Proteins and proteomics: a laboratory manual》!

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7楼2012-05-09 10:10:19

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haixing2008

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不懂帮顶！

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8楼2012-05-09 10:19:13

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樱桃敏敏

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7楼: Originally posted by zero623 at 2012-05-09 10:10:19:
我来回答你的问题：
1. markers还是需要的，要不然无法确定分离后的蛋白大小范围！条件实验是可以不加，但是最后论文上要用的图最好还是要用！

2. IPG胶条的长度越长越好（主要与后续SDS-PAGE电泳槽兼容），这 ...

好的非常感谢您我找找看呵呵马上就要做实验了还得好好找找呢以后还有问题请假您哦谢谢您

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20楼2012-05-09 18:41:47

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boyuanbio

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如果你想知道蛋白分布的分子量情况的话可以加Mark，如果的目的是进行差异比较，后续做质谱鉴定的话，就可以不加的，胶条的长度选择是根据你所要分离的蛋白的决定的，我们一般选择24cm的，用12%的分离胶
12%的凝胶（每块胶约65ml，做一次凝胶需要浪费的体积大约是30ml）
试剂 160 ml（2块） 225 ml（3块） 290 ml（4块） 355 ml（5块） 420 ml（6块）
30%Acr/Bis（37.5：1）（ml） 64 90 116 142 168
超纯水（ml） 54 76 98 120 142
1.5 M Tris-HCL（pH8.8）（ml） 40 56 72.4 89 105
10% SDS （ml） 1.6 2.3 2.9 3.6 4.2
10%AP（ul） 800 1130 1450 1780 2100
TEMED（ul） 80 113 145 178 210

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21楼2012-08-02 14:40:16

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