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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双向电泳，溴酚蓝需要过滤吗？
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hrjxx

新虫 (小有名气)

[求助] 双向电泳，溴酚蓝需要过滤吗？

我做双向，电压上不去，好像是溴酚蓝的原因，请问，在双向电泳里，溴酚蓝是不是需要预先过滤啊？？
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1楼 2012-04-12 00:07:09
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回帖置顶 ( 共有2个 )

hrjxx

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by Rubisco580 at 2012-04-12 14:35:32:
我做过肝癌组织。1万伏比较顺利上去。
建议楼主在制样上多下工夫，控制盐离子浓度。

谢谢啊，你是用试剂盒，还是传统方法啊》》有用试剂盒除盐吗？？不知道能不能提供一个你的制样的PROTOCOL 啊？？
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7楼2012-04-12 14:45:34
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hrjxx

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by guxinhan123 at 2012-04-13 13:54:16:
真怀疑是溴酚蓝的原因可以不放的，我现在几乎都没放过，不影响实验。不知楼主做什么材料？蛋白提取方法如何？

你好啊，我做的是肌肉组织蛋白，不知道楼上用的是什么提取方法啊，我用的丙酮沉淀，然后裂解液裂解，离心的（貌似说这是植物的提法），但是效果不好，不知道你是否有成熟的方法啊？？
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11楼2012-04-13 19:23:46
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普通回帖

telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
电压和溴酚蓝有必然联系吗？最多是不好进样或是进的不好
应该还是你的槽子哪里短路了吧
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
2楼2012-04-12 08:31:43
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hrjxx: 金币+1, ★有帮助, 谢谢啊，你是做等电聚焦吗，你的溴酚蓝是进口的还是？？过滤是去除杂质，还是去除不溶的啊？ 2012-04-12 14:25:08
我实验室操作时溴酚蓝需要过滤，用一般国产的滤头就可以。
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hehe
3楼2012-04-12 08:33:57
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助，谢谢分享 2012-04-12 13:48:04
hrjxx: 金币+2, 谢谢，我用的国产溴酚蓝呢，你那样也就是不用过滤了，那你的电压都可以很顺利，上去吗？？请问你做的是什么组织啊？？ 2012-04-12 14:26:30
电压上不去，更多的原因是样品盐离子浓度高，就是制样问题。溴酚蓝的影响不是很显著。
可以告诉楼主个小窍门，我们用的进口溴酚蓝，不配溶液，使用的时候颠倒一下，再取下盖子，对着烧杯弹几下，溶液就蓝了。几下就够。
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4楼2012-04-12 11:17:02
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hrjxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by telomerase at 2012-04-12 08:31:43:
电压和溴酚蓝有必然联系吗？最多是不好进样或是进的不好
应该还是你的槽子哪里短路了吧

呵呵，谢谢斑竹啊 ，我说的是等电聚焦呢，不是垂直电泳啊
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5楼2012-04-12 14:24:05
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Rubisco580

金虫 (小有名气)
我做过肝癌组织。1万伏比较顺利上去。
建议楼主在制样上多下工夫，控制盐离子浓度。
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hrjxx
6楼2012-04-12 14:35:32
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Rubisco580

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hrjxx at 2012-04-12 14:45:34:
谢谢啊，你是用试剂盒，还是传统方法啊》》有用试剂盒除盐吗？？不知道能不能提供一个你的制样的PROTOCOL 啊？？

传统方法，裂解液＋超声破碎。
除盐的话有clean－up试剂盒，但是蛋白丢失严重，看你的实验需求了。
很久之前做的了，具体参数记不清了。
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hrjxx
8楼2012-04-12 15:02:05
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hrjxx

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by Rubisco580 at 2012-04-12 15:02:05:
传统方法，裂解液＋超声破碎。
除盐的话有clean－up试剂盒，但是蛋白丢失严重，看你的实验需求了。
很久之前做的了，具体参数记不清了。

谢谢啊，有用试剂盒来除盐吗？你做的时候，或者说用过丙酮沉淀没？？
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9楼2012-04-12 15:09:28
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guxinhan123

银虫 (正式写手)
真怀疑是溴酚蓝的原因可以不放的，我现在几乎都没放过，不影响实验。不知楼主做什么材料？蛋白提取方法如何？
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hrjxx
10楼2012-04-13 13:54:16
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