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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 5 RACE inner-PCR电泳结果无条带，是怎么回事？
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xiaofeixiayang

金虫 (小有名气)

[求助] 5 RACE inner-PCR电泳结果无条带，是怎么回事？

请教高手，我做5RACE outer-PCR时，电泳结果没有任何条带（引物二聚体都没有），同学说这也正常，可以接着做inner-PCR，但我做了Inner-PCR电泳结果除了引物二聚体外，也是什么条带也没有，请教高手，这是怎么回事？如何解决？非常感谢！
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1楼 2012-05-13 17:00:01
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hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-14 13:39:47
你做outer-PCR前先用特异性引物验证你的模板有没有你的目的基因，做完outer-PCR稀释过后再用特异性引物有无扩增出你的目的基因~确定模板没问题之后再找其他原因吧
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scienceguy
2楼2012-05-13 22:30:59
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaofeixiayang: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-05-17 15:33:16
你拿你的5RACE库，检测一下其他已知基因，如actin,建库没有问题的话，你可以再多设计几条引物。
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3楼2012-05-14 09:39:46
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xiaofeixiayang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hellolin at 2012-05-13 22:30:59:
你做outer-PCR前先用特异性引物验证你的模板有没有你的目的基因，做完outer-PCR稀释过后再用特异性引物有无扩增出你的目的基因~确定模板没问题之后再找其他原因吧

用特异性引物验证，只能证明我cDNA有没有反转成功，不能证明接头等其他操作有没有问题，不过还是非常感谢虫友的答复！
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4楼2012-05-17 15:36:31
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漫漫123

金虫 (小有名气)
我现在也在做这个，情况跟楼主一样，楼主的问题后来怎么解决的？
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5楼2015-07-08 17:00:07
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