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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 5‘RACE巢式PCR 求指导
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小城大宝

新虫 (初入文坛)

[求助] 5‘RACE巢式PCR 求指导

跑5“race 巢式PCR 跑完后有很多条带 大概有6条条带 没有特别亮的 请教各位下面我该怎么做 回收的话又不知道如何下手 苦恼 求前辈指导 是否我的巢式引物不好 还是有什么其他解决方法 十分感谢
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1楼 2012-12-02 17:51:10
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倾听世界0721

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

最保险的方法就是做个浓度大点的胶都回收了，电泳多跑一会儿。
引物就按RACE说明书上的要求设计行了。
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2楼2012-12-05 20:44:16
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apple712

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

先问你两个问题：你的6个带size都差不多吗？你要克隆的这个基因是不是有很多个同源基因？一般情况下，遇到你这种情况，我的建议都回收进行测序。如果这几个带大小差不多，切起来有难度的话，可以一起切了回收，后面连t-vector的时候多挑克隆。说不定你这个基因就是有很多同源的基因也不一定。
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3楼2012-12-05 21:53:01
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小城大宝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by apple712 at 2012-12-05 21:53:01
先问你两个问题：你的6个带size都差不多吗？你要克隆的这个基因是不是有很多个同源基因？一般情况下，遇到你这种情况，我的建议都回收进行测序。如果这几个带大小差不多，切起来有难度的话，可以一起切了回收，后面 ...

六个带大小还是有差异的，从1000多到200都有。是有很多同源基因的。谢谢你，我会回收看看的。十分感谢！祝一切顺利。
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4楼2012-12-06 10:31:09
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小城大宝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 倾听世界0721 at 2012-12-05 20:44:16
最保险的方法就是做个浓度大点的胶都回收了，电泳多跑一会儿。
引物就按RACE说明书上的要求设计行了。

谢谢你！我准备回收看看。祝顺利。
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用你的笑容去改变这个世界，别让这个世界改变了你的笑容。
5楼2012-12-06 10:32:01
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apple712

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小城大宝: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-17 10:02:11
既然差距这么大，就先回收离你的推测最近的了，看样子你的基因片段不是很大，差距这么多不一定就都是你要的了，一一排除，不过还是要注意一下cDNA的质量，我觉得这个是做race的关键。
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6楼2012-12-06 19:43:29
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