24小时热门版块排行榜

返回列表

人生初见

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 4182.9
散金: 7
红花: 2
帖子: 212
在线: 55.9小时
虫号: 1078452
注册: 2010-08-20
专业: 植物化学保护

[求助] 通过RT-PCR 获得了一段保守序列接着如何设计RACE引物

如题
我要做的是一个未知基因，依据已知物种的对比设计出了引物，做了RT-PCR获得了大约500bp的片段，现在要获得全长，做RACE。
kit 中说设计3‘和5’引物各为sense 和antisense 引物，我现在又个很纠结的问题，一般测序结果的序列是正链还是负链呢？怎么知道测序结果是从5‘到3’ 还是从3‘到5’呢？然后怎么设计引物？
P.S.
我的电脑装的是win7 32位的，可以装PP5吗？装了个PP6好像不好用

我是RACE新手请教各位大虾！！！

回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wangweida2

» 猜你喜欢

WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有107人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性已经有0人回复
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点已经有0人回复
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

要P一段基因全长，已知CDS，怎么设计引物啊？已经有10人回复
求高手指点：RT-PCR的引物设计已经有18人回复
PCR引物设计的问题已经有8人回复
RT-PCR引物设计已经有8人回复
PCR引物怎么根据序列图设计啊？希望哪位大侠指导下，感激不尽已经有5人回复
做RT-PCR时该用哪段氨基酸序列设计引物已经有6人回复
【求助/交流】荧光定量PCR与半定量的RT－PCR在设计引物时有什么区别？已经有8人回复
【求助/交流】RACE引物设计已经有5人回复
【求助/交流】怎样在一段序列中查找可能的测序引物？已经有4人回复
【求助/交流】关于RT-PCR引物设计已经有9人回复
求高人帮我设计两段序列的PCR引物已经有1人回复
【求助/交流】Real time RT-PCR 引物设计问题（高悬赏请高手帮忙）已经有28人回复
【求助/交流】新手请教如何对不同物种中某一酶的氨基酸序列进行比对再设计简并引物啊� 已经有10人回复

1楼 2012-04-09 18:04:12

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

孙妙妙

金虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 904.9
散金: 13
红花: 2
帖子: 132
在线: 62.5小时
虫号: 1388946
注册: 2011-09-03
专业: 生物化学

引用回帖:

15楼: Originally posted by 夏小狼xia123 at 2013-05-05 23:24:27

同问！...

我已经做完实验，分享下心得，其实RACE引物的设计不难，首先要搞清楚不论是5'还是3'，都是以正义链来看方向的，所以3'RACE的引物是以反义链为模板，朝正义链3'的方向走（其实也想当于我们平时设计的上游引物），只要把这个方向问题搞清除了，其他就是按照它的原则，比如GC含量50%-70%，Tm值高于65度等，试剂盒说明书上的要求来就可以了。5'同理。希望对你有帮助