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人生初见

木虫 (小有名气)

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专业: 植物化学保护

[求助] 通过RT-PCR 获得了一段保守序列接着如何设计RACE引物

如题
我要做的是一个未知基因，依据已知物种的对比设计出了引物，做了RT-PCR获得了大约500bp的片段，现在要获得全长，做RACE。
kit 中说设计3‘和5’引物各为sense 和antisense 引物，我现在又个很纠结的问题，一般测序结果的序列是正链还是负链呢？怎么知道测序结果是从5‘到3’ 还是从3‘到5’呢？然后怎么设计引物？
P.S.
我的电脑装的是win7 32位的，可以装PP5吗？装了个PP6好像不好用

我是RACE新手请教各位大虾！！！

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wangweida2

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1楼 2012-04-09 18:04:12

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夏小狼xia123

铜虫 (初入文坛)

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专业: 生物大分子结构与功能

引用回帖:

14楼: Originally posted by 孙妙妙 at 2012-07-16 16:09:41
我也是新手，请问特异引物到底要怎么设计啊？3’RACE的引物是上游还是下游引物啊？
我是通过几个物种比对后获得保守序列，设计特异引物获得了保守区，想用RACE来获得全长，但是怎么设计RACE引物，搞不清，到底怎么 ...

同问！