应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 巢氏PCR引物如何设计？
121/1返回列表
查看: 2929  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)

[交流] 巢氏PCR引物如何设计？

如题，巢氏PCR引物如何设计
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-06-12 17:25:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 蓝慧 at 2012-06-13 17:19:39
请教，巢式PCR的目的是什么？...

主要是增加特异性。可以参考百度百科：

　　巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR)，使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。巢式PCR的好处在于，如果第一次扩增产生了错误片断，则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低。因此，巢式PCR的扩增非常特异。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2012-06-13 18:39:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+3, 辛苦，鼓励下。 2012-06-12 18:17:55
uuu555000: 金币+1 2012-06-12 18:21:38
巢式PCR就是2轮PCR,第二次PCR以第一次PCR的产物为模板。第二对引物设计上比第一对里面更靠里，就是说第二次PCR的产物比第一次的产物要短一些。至于短多少，至少两端各往里几个bp。其他就和普通PCR没什么特别的啦。
赞一下 回复此楼
2楼2012-06-12 17:53:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-06-12 17:53:17
巢式PCR就是2轮PCR,第二次PCR以第一次PCR的产物为模板。第二对引物设计上比第一对里面更靠里，就是说第二次PCR的产物比第一次的产物要短一些。至于短多少，至少两端各往里几个bp。其他就和普通PCR没什么特别的啦。

还能第一次PCR产物，第一次的引物，还能pcr？
赞一下 回复此楼
3楼2012-06-12 18:21:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 辛苦了 2012-06-13 13:36:34
引用回帖:
3楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-06-12 18:21:30
还能第一次PCR产物，第一次的引物，还能pcr？...

第一次的引物再用，效果不好，酶需要一些额外片段来结合在模板上，所以第二对引物要靠里。引物不同，能增加特异性，这也是巢式PCR的意义所在啦。你可以百度一下原理，看到图片会更好理解哈
赞一下 回复此楼
4楼2012-06-12 18:24:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-06-12 18:24:09
第一次的引物再用，效果不好，酶需要一些额外片段来结合在模板上，所以第二对引物要靠里。引物不同，能增加特异性，这也是巢式PCR的意义所在啦。你可以百度一下原理，看到图片会更好理解哈...

第一次的PCR产物不稀释能直接作为第2轮的模板？
赞一下 回复此楼
5楼2012-06-12 18:49:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
uuu555000: 金币+9 2012-06-12 19:13:04
引用回帖:
5楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-06-12 18:49:40
第一次的PCR产物不稀释能直接作为第2轮的模板？...

可以的，就是要这么做
赞一下 回复此楼
6楼2012-06-12 19:01:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-06-12 19:01:03
可以的，就是要这么做...

第1轮的产物不割胶回收，能直接上PCR？
赞一下 回复此楼
7楼2012-06-12 19:12:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

证明题

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-06-12 19:12:59
第1轮的产物不割胶回收，能直接上PCR？...

可以的，就是要求要内里的巢式引物与第一轮的外部引物不同，这样即使不割胶回收第一次PCR产物，也能保证其特异性和扩增效率。
赞一下 回复此楼
8楼2012-06-12 20:42:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-06-12 19:12:59
第1轮的产物不割胶回收，能直接上PCR？...

楼上正解啦
回复此楼
9楼2012-06-12 21:06:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝慧

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-06-12 18:53:17
巢式PCR就是2轮PCR,第二次PCR以第一次PCR的产物为模板。第二对引物设计上比第一对里面更靠里，就是说第二次PCR的产物比第一次的产物要短一些。至于短多少，至少两端各往里几个bp。其他就和普通PCR没什么特别的啦。

请教，巢式PCR的目的是什么？
赞一下 回复此楼
10楼2012-06-13 17:19:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwy3511

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 证明题 at 2012-06-12 20:42:43
可以的，就是要求要内里的巢式引物与第一轮的外部引物不同，这样即使不割胶回收第一次PCR产物，也能保证其特异性和扩增效率。...

那请问如果第一轮P完跑胶看不到条带，P第二轮还有意义吗？同时发现用第二轮引物可以一次直接P出来，那这样是否就不需要前面第一轮简并引物去P了？
求指教。我是分子生物学菜鸟
赞一下 回复此楼
12楼2016-03-16 09:34:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 uuu555000 的主题更新
121/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭