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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 巢氏PCR引物如何设计？
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uuu555000

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[交流] 巢氏PCR引物如何设计？

如题，巢氏PCR引物如何设计
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1楼 2012-06-12 17:25:08
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lwy3511

新虫 (初入文坛)
★
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8楼: Originally posted by 证明题 at 2012-06-12 20:42:43
可以的，就是要求要内里的巢式引物与第一轮的外部引物不同，这样即使不割胶回收第一次PCR产物，也能保证其特异性和扩增效率。...

那请问如果第一轮P完跑胶看不到条带，P第二轮还有意义吗？同时发现用第二轮引物可以一次直接P出来，那这样是否就不需要前面第一轮简并引物去P了？
求指教。我是分子生物学菜鸟
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12楼2016-03-16 09:34:47
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+3, 辛苦，鼓励下。 2012-06-12 18:17:55
uuu555000: 金币+1 2012-06-12 18:21:38
巢式PCR就是2轮PCR,第二次PCR以第一次PCR的产物为模板。第二对引物设计上比第一对里面更靠里，就是说第二次PCR的产物比第一次的产物要短一些。至于短多少，至少两端各往里几个bp。其他就和普通PCR没什么特别的啦。
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2楼2012-06-12 17:53:17
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uuu555000

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-06-12 17:53:17
巢式PCR就是2轮PCR,第二次PCR以第一次PCR的产物为模板。第二对引物设计上比第一对里面更靠里，就是说第二次PCR的产物比第一次的产物要短一些。至于短多少，至少两端各往里几个bp。其他就和普通PCR没什么特别的啦。

还能第一次PCR产物，第一次的引物，还能pcr？
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3楼2012-06-12 18:21:30
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 辛苦了 2012-06-13 13:36:34
引用回帖:
3楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-06-12 18:21:30
还能第一次PCR产物，第一次的引物，还能pcr？...

第一次的引物再用，效果不好，酶需要一些额外片段来结合在模板上，所以第二对引物要靠里。引物不同，能增加特异性，这也是巢式PCR的意义所在啦。你可以百度一下原理，看到图片会更好理解哈
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4楼2012-06-12 18:24:09
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