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uuu555000

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[交流] 巢氏PCR引物如何设计?

如题,巢氏PCR引物如何设计
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金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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7楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-06-12 19:12:59
第1轮的产物不割胶回收,能直接上PCR?...

可以的,就是要求要内里的巢式引物与第一轮的外部引物不同,这样即使不割胶回收第一次PCR产物,也能保证其特异性和扩增效率。
8楼2012-06-12 20:42:43
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★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+3, 辛苦,鼓励下。 2012-06-12 18:17:55
uuu555000: 金币+1 2012-06-12 18:21:38
巢式PCR就是2轮PCR,第二次PCR以第一次PCR的产物为模板。第二对引物设计上比第一对里面更靠里,就是说第二次PCR的产物比第一次的产物要短一些。至于短多少,至少两端各往里几个bp。其他就和普通PCR没什么特别的啦。
2楼2012-06-12 17:53:17
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uuu555000

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-06-12 17:53:17
巢式PCR就是2轮PCR,第二次PCR以第一次PCR的产物为模板。第二对引物设计上比第一对里面更靠里,就是说第二次PCR的产物比第一次的产物要短一些。至于短多少,至少两端各往里几个bp。其他就和普通PCR没什么特别的啦。

还能第一次PCR产物,第一次的引物,还能pcr?
3楼2012-06-12 18:21:30
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★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 辛苦了 2012-06-13 13:36:34
引用回帖:
3楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-06-12 18:21:30
还能第一次PCR产物,第一次的引物,还能pcr?...

第一次的引物再用,效果不好,酶需要一些额外片段来结合在模板上,所以第二对引物要靠里。引物不同,能增加特异性,这也是巢式PCR的意义所在啦。你可以百度一下原理,看到图片会更好理解哈
4楼2012-06-12 18:24:09
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