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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 巢氏PCR引物如何设计？
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uuu555000

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[交流] 巢氏PCR引物如何设计？

如题，巢氏PCR引物如何设计
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1楼 2012-06-12 17:25:08
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 蓝慧 at 2012-06-13 17:19:39
请教，巢式PCR的目的是什么？...

主要是增加特异性。可以参考百度百科：

　　巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR)，使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。巢式PCR的好处在于，如果第一次扩增产生了错误片断，则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低。因此，巢式PCR的扩增非常特异。
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11楼2012-06-13 18:39:41
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+3, 辛苦，鼓励下。 2012-06-12 18:17:55
uuu555000: 金币+1 2012-06-12 18:21:38
巢式PCR就是2轮PCR,第二次PCR以第一次PCR的产物为模板。第二对引物设计上比第一对里面更靠里，就是说第二次PCR的产物比第一次的产物要短一些。至于短多少，至少两端各往里几个bp。其他就和普通PCR没什么特别的啦。
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2楼2012-06-12 17:53:17
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-06-12 17:53:17
巢式PCR就是2轮PCR,第二次PCR以第一次PCR的产物为模板。第二对引物设计上比第一对里面更靠里，就是说第二次PCR的产物比第一次的产物要短一些。至于短多少，至少两端各往里几个bp。其他就和普通PCR没什么特别的啦。

还能第一次PCR产物，第一次的引物，还能pcr？
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3楼2012-06-12 18:21:30
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 辛苦了 2012-06-13 13:36:34
引用回帖:
3楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-06-12 18:21:30
还能第一次PCR产物，第一次的引物，还能pcr？...

第一次的引物再用，效果不好，酶需要一些额外片段来结合在模板上，所以第二对引物要靠里。引物不同，能增加特异性，这也是巢式PCR的意义所在啦。你可以百度一下原理，看到图片会更好理解哈
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4楼2012-06-12 18:24:09
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