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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教下巢式PCR与二次PCR的区别
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wwling

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教下巢式PCR与二次PCR的区别 已有12人参与

最近纠结于这个问题，具体的是因为不太懂巢式PCR，是不是只要有两对引物就可以呢？看网上说的是直接拿第一轮PCR产物为模板做第二轮扩增，想问的是为什么不直接用第二轮的引物扩增，得到的产物做模板继续用第二轮引物扩增（即二次PCR）？
  望虫子们指导下~~
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1楼 2011-02-22 17:35:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+6): good 2011-02-23 09:40:00

巢式PCR虽然也是扩增两次，但是跟二次PCR相比，它的优势是多方面的。

巢式PCR的两对引物是嵌套的，即第二对引物是在第一对引物往里的。

这点区别产生的优点很多：能够提高检测的特异性，在巢式过程中往往第一轮的PCR

产物跑电泳啥都看不到，但是经过第二轮的PCR，产物就很亮了。这点我深有体会，

曾经试验室里一个兄弟帮别人检测黄瓜根际真菌，只要一个孢子，液氮碾磨，做巢式

就能检测出来。

这个优点是二次PCR所不能媲美的。



另外还有一点就是从酶的角度分析，你从3kb的片段上扩1kb的序列的效率要比1kb设

计引物扩增自身高的多得多。聚合酶起作用的时候同样需要扩增起始位点的上游有一

段序列，方便结合。所以说，巢式PCR在检测中的检测限要比二次PCR低的低得多，要

更加灵敏。尤其是样品中目的序列的丰度较低的情况下，巢式PCR的优势就展现出来了。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2011-02-22 18:40:33
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普通回帖

abc5710110

金虫 (著名写手)
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dhd997(金币+2): good 2011-02-22 18:39:29

在百度百科上找到些关于巣式PCR的信息，与普通PCR相比，优点主要的提高了特异性，有效的减少了错配影响。
http://baike.baidu.com/view/688277.htm
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强化多边交流，实现互利共赢
2楼2011-02-22 18:33:17
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)
★
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建议你读一下基因工程这本书
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倚楼听风雨，淡看江湖路！
3楼2011-02-22 18:37:23
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
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dhd997(金币+2): good 2011-02-23 09:40:08

一点最重要，巢式PCR第二次扩增的时候更有利于引物与模板结合。
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Thank-you，so-blue.
5楼2011-02-22 20:04:12
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wwling

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-22 10:40:33:
巢式PCR虽然也是扩增两次，但是跟二次PCR相比，它的优势是多方面的。

巢式PCR的两对引物是嵌套的，即第二对引物是在第一对引物往里的。

这点区别产生的优点很多：能够提高检测的特异性，在巢式过程中往往第 ...

十分感谢！
的确我也体会到了 我用文献中的一对引物扩的效果很不好，然后我自己设计了一对引物，也刚好在这对引物扩增区域内，效果的确不错，所以想用这两对引物做两轮PCR（不知道叫不叫巢式？）但老师更倾向于用我自己设计的这对引物直接做二次PCR，不知道到底哪种合理
  ps:后续要用产物做DGGE，不知可不可行？
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6楼2011-02-22 20:31:35
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
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dhd997(金币+2): 谢谢交流 2011-02-23 09:40:27

两轮PCR增强特异性，排除序列相似的模板
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7楼2011-02-22 21:53:20
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luckyph.D

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提高PCR特异性 减少错配的几率
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8楼2012-10-26 14:49:48
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ljx2ljx

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也是做巢式PCR，第一轮没有检测啥也没有，现在正在做第二轮，可以交流一下啊。
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9楼2013-05-16 20:03:53
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glittering9

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by ljx2ljx at 2013-05-16 20:03:53
我也是做巢式PCR，第一轮没有检测啥也没有，现在正在做第二轮，可以交流一下啊。

请问你扩出来了么？我一直都没有扩出来，体系时一个老师构建的，他之前就扩的很好，但是我做就做不出来了，而且样品一直在点样孔了出不来，可不可以交流一下
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10楼2013-06-03 15:27:56
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