| 查看: 4631 | 回复: 12 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
【求助/交流】请教下巢式PCR与二次PCR的区别 已有12人参与
|
||||
|
最近纠结于这个问题，具体的是因为不太懂巢式PCR，是不是只要有两对引物就可以呢？看网上说的是直接拿第一轮PCR产物为模板做第二轮扩增，想问的是为什么不直接用第二轮的引物扩增，得到的产物做模板继续用第二轮引物扩增（即二次PCR）？ 望虫子们指导下~~ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 经验 |
» 猜你喜欢
93BebMhtakh前后11位开头都是大写
已经有5人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有86人回复
-
感觉是下周放榜了
已经有11人回复
-
filecode=后面第一个是大写字母
已经有10人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有4人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有15人回复
-
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有9人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有25人回复
-
2027广东省杰青
已经有6人回复
-
快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教RNA提取高手：反转录PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已经有18人回复
- 酶切酶连转化
已经有11人回复
- 二次PCR的问题
已经有8人回复
- 二次PCR产物弥散
已经有12人回复
- 请教RTPCR。。
已经有4人回复
- 巢式PCR后不是单一带
已经有11人回复
- 【求助/交流】求PCR二次扩增引物
已经有11人回复
- 【求助/交流】请教关于PCR
已经有3人回复
- 【求助/交流】请教关于PCR的问题！！！
已经有12人回复
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 908 (博后)
- 金币: 17450.7
- 散金: 1682
- 红花: 121
- 沙发: 42
- 帖子: 14596
- 在线: 2201.9小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
7楼2011-02-22 21:53:20
abc5710110
金虫 (著名写手)
- 应助: 33 (小学生)
- 金币: 93.4
- 散金: 1209
- 红花: 10
- 帖子: 2140
- 在线: 238.5小时
- 虫号: 1194602
- 注册: 2011-01-22
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): good 2011-02-22 18:39:29
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): good 2011-02-22 18:39:29
|
在百度百科上找到些关于巣式PCR的信息，与普通PCR相比，优点主要的提高了特异性，有效的减少了错配影响。 http://baike.baidu.com/view/688277.htm |
2楼2011-02-22 18:33:17
3楼2011-02-22 18:37:23
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
我爱打老虎
- MicEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113345
- 散金: 1526
- 红花: 224
- 沙发: 1
- 帖子: 28965
- 在线: 3721.1小时
- 虫号: 464575
- 注册: 2007-11-21
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+6): good 2011-02-23 09:40:00
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+6): good 2011-02-23 09:40:00
|
巢式PCR虽然也是扩增两次，但是跟二次PCR相比，它的优势是多方面的。 巢式PCR的两对引物是嵌套的，即第二对引物是在第一对引物往里的。 这点区别产生的优点很多：能够提高检测的特异性，在巢式过程中往往第一轮的PCR 产物跑电泳啥都看不到，但是经过第二轮的PCR，产物就很亮了。这点我深有体会， 曾经试验室里一个兄弟帮别人检测黄瓜根际真菌，只要一个孢子，液氮碾磨，做巢式 就能检测出来。 这个优点是二次PCR所不能媲美的。 另外还有一点就是从酶的角度分析，你从3kb的片段上扩1kb的序列的效率要比1kb设 计引物扩增自身高的多得多。聚合酶起作用的时候同样需要扩增起始位点的上游有一 段序列，方便结合。所以说，巢式PCR在检测中的检测限要比二次PCR低的低得多，要 更加灵敏。尤其是样品中目的序列的丰度较低的情况下，巢式PCR的优势就展现出来了。 |
4楼2011-02-22 18:40:33
