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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 二次PCR的问题
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catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长

[求助] 二次PCR的问题

二次PCR可以用来扩增目的片段而不用再去提模板，但是二次PCR会不会影响目的片段的长度？（原来的引物上是带有酶切位点的，二次PCR后，新扩增出来的片段酶切位点会消失吗？）
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1楼 2011-12-14 14:33:55
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般来说没这么巧就酶切位点错配了吧
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
2楼2011-12-14 15:57:20
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catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长
引用回帖:
楼: Originally posted by j2 at 2011-12-14 15:57:20:
一般来说没这么巧就酶切位点错配了吧

那也是有可能了？
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3楼2011-12-14 16:31:06
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
catmihzh(金币+2): 谢谢解答 2011-12-16 12:29:23
你二次PCR用的引物和第一次PCR一样的话酶切位点不会消失呀，要是二次PCR引物换了，那酶切位点自然就没了！！！扩增片段长度也是和换没换引物有关系！！！
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大家共同交流、共同提高！！！
4楼2011-12-14 19:49:56
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

catmihzh(金币+2): 谢谢 2011-12-16 12:29:42
错配的几率很低很低······
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
5楼2011-12-14 20:30:56
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catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长
引用回帖:
楼: Originally posted by gene001 at 2011-12-14 19:49:56:
你二次PCR用的引物和第一次PCR一样的话酶切位点不会消失呀，要是二次PCR引物换了，那酶切位点自然就没了！！！扩增片段长度也是和换没换引物有关系！！！

没换啊
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6楼2011-12-15 14:20:06
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catmihzh

木虫 (小有名气)

虫虫特攻队队长
引用回帖:
楼: Originally posted by j2 at 2011-12-14 20:30:56:
错配的几率很低很低······

那就好。。
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7楼2011-12-15 14:20:31
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小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
长度不会变，但是可能会在第一次PCR产物的基础上增加一点突变的几率吧。
毕竟你不能保证第一次PCR出来的产物全部正确。
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8楼2011-12-15 17:35:50
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by catmihzh at 2011-12-15 14:20:06:
没换啊

那就片段长度不会变，内切酶切割位点也不会变！
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大家共同交流、共同提高！！！
9楼2011-12-15 18:36:00
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