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【求助/交流】请教下巢式PCR与二次PCR的区别 已有12人参与
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最近纠结于这个问题，具体的是因为不太懂巢式PCR，是不是只要有两对引物就可以呢？看网上说的是直接拿第一轮PCR产物为模板做第二轮扩增，想问的是为什么不直接用第二轮的引物扩增，得到的产物做模板继续用第二轮引物扩增（即二次PCR）？ 望虫子们指导下~~ |
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susizheng
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在百度百科上找到些关于巣式PCR的信息，与普通PCR相比，优点主要的提高了特异性，有效的减少了错配影响。 http://baike.baidu.com/view/688277.htm |
2楼2011-02-22 18:33:17
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巢式PCR虽然也是扩增两次，但是跟二次PCR相比，它的优势是多方面的。 巢式PCR的两对引物是嵌套的，即第二对引物是在第一对引物往里的。 这点区别产生的优点很多：能够提高检测的特异性，在巢式过程中往往第一轮的PCR 产物跑电泳啥都看不到，但是经过第二轮的PCR，产物就很亮了。这点我深有体会， 曾经试验室里一个兄弟帮别人检测黄瓜根际真菌，只要一个孢子，液氮碾磨，做巢式 就能检测出来。 这个优点是二次PCR所不能媲美的。 另外还有一点就是从酶的角度分析，你从3kb的片段上扩1kb的序列的效率要比1kb设 计引物扩增自身高的多得多。聚合酶起作用的时候同样需要扩增起始位点的上游有一 段序列，方便结合。所以说，巢式PCR在检测中的检测限要比二次PCR低的低得多，要 更加灵敏。尤其是样品中目的序列的丰度较低的情况下，巢式PCR的优势就展现出来了。 |
4楼2011-02-22 18:40:33
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