应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 昆虫基因PCR后电泳条带淡，急求帮助？？？？
51/1返回列表
查看: 1719  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

高照李

木虫 (正式写手)

[求助] 昆虫基因PCR后电泳条带淡，急求帮助？？？？

我在做几种昆虫的DNA线粒体DNA COI片段，目的基因大小约600-700bp,用pcr扩增COI片段，50μl的扩增反应体系是：
Premix Ex Taq   25μl
引物1（LCO1490)（10μM）2μl
引物2 (HCO2198)（10μM）2μl
模板1μl（<50ng）1~4μ不等，浓度在150~300ng/ul。
加水至50ul。
   PCR反应程序：95度10min。94℃预变性3min，94℃变性60s，44℃退火60s，72℃延伸60s，共35个循环，循环结束后，72℃延伸10min。
图中显示有的条带太暗了而且有的有弥散，引物正常。做过退火温度的梯度实验，有出来的条带但很淡。今晚做的条带更淡且有弥散。请问我该怎么调？
另外昨天做实验时水加少了，结果有的种类出来了，请问是预混酶浓度变化的问题吗？不知道哪位高人能帮帮分析一下？

未标题-2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-02-01 19:47:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hpzhao1980

新虫 (初入文坛)
你比我强，我做了一天发现没有跑出一个条带！！！！！
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-18 21:02:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1989zb

金虫 (小有名气)
一样啊 我一直做 一直都是条带暗 各种条件变了都一样
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-18 21:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastropoda

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

个人建意加大Taq酶的量试一下.
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-11 14:09:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1279341226

新虫 (初入文坛)
我现在正在做寄生蜂的这个该片段，用的同样的引物，不知道是不是虫子太小，而且用的是无损伤提取方法，连很淡的条带都没有，请问前辈做的是哪几种虫子呀，求助哇。。。
赞一下 回复此楼
5楼2015-04-06 21:07:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 高照李 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +9 锦衣卫寒战 2026-07-28 13/650 2026-08-04 07:21 by Ermito
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 8/400 2026-08-04 06:17 by k7OM8YghWbkC
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 8/400 2026-08-04 06:15 by k7OM8YghWbkC
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 6/300 2026-08-04 06:10 by k7OM8YghWbkC
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 06:07 by k7OM8YghWbkC
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 4/200 2026-08-04 04:54 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 6/300 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 9/450 2026-08-04 03:56 by kf2781974
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 12/600 2026-08-04 03:17 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[高分子] UV压敏胶开发 +3 ichall 2026-07-30 5/250 2026-08-03 14:40 by Sunrisepay
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 16/800 2026-08-03 12:23 by fuweiguochen
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭