24小时热门版块排行榜    

查看: 1419  |  回复: 4

高照李

木虫 (正式写手)

[求助] 昆虫基因PCR后电泳条带淡,急求帮助????

我在做几种昆虫的DNA线粒体DNA COI片段,目的基因大小约600-700bp,用pcr扩增COI片段,50μl的扩增反应体系是:
Premix Ex Taq   25μl
引物1(LCO1490)(10μM)2μl
引物2 (HCO2198)(10μM)2μl
模板1μl(<50ng)1~4μ不等,浓度在150~300ng/ul。
加水至50ul。
   PCR反应程序:95度10min。94℃预变性3min,94℃变性60s,44℃退火60s,72℃延伸60s,共35个循环,循环结束后,72℃延伸10min。
图中显示有的条带太暗了而且有的有弥散,引物正常。做过退火温度的梯度实验,有出来的条带但很淡。今晚做的条带更淡且有弥散。请问我该怎么调?
另外昨天做实验时水加少了,结果有的种类出来了,请问是预混酶浓度变化的问题吗?不知道哪位高人能帮帮分析一下?

未标题-2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hpzhao1980

新虫 (初入文坛)

你比我强,我做了一天发现没有跑出一个条带!!!!!
2楼2013-03-18 21:02:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1989zb

金虫 (小有名气)

一样啊 我一直做 一直都是条带暗 各种条件变了都一样
3楼2013-03-18 21:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastropoda

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

个人建意加大Taq酶的量试一下.
4楼2013-04-11 14:09:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1279341226

新虫 (初入文坛)

我现在正在做寄生蜂的这个该片段,用的同样的引物,不知道是不是虫子太小,而且用的是无损伤提取方法,连很淡的条带都没有,请问前辈做的是哪几种虫子呀,求助哇。。。
5楼2015-04-06 21:07:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 高照李 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +12 陌の森林 2026-03-18 12/600 2026-03-19 17:55 by 绿色低碳化学
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-18 3/150 2026-03-19 14:42 by peike
[考研] 317求调剂 +3 申子申申 2026-03-19 6/300 2026-03-19 14:16 by 申子申申
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 287求调剂 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-19 12:32 by peike
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
信息提示
请填处理意见