24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1455  |  回复: 4

高照李

木虫 (正式写手)

[求助] 昆虫基因PCR后电泳条带淡,急求帮助????

我在做几种昆虫的DNA线粒体DNA COI片段,目的基因大小约600-700bp,用pcr扩增COI片段,50μl的扩增反应体系是:
Premix Ex Taq   25μl
引物1(LCO1490)(10μM)2μl
引物2 (HCO2198)(10μM)2μl
模板1μl(<50ng)1~4μ不等,浓度在150~300ng/ul。
加水至50ul。
   PCR反应程序:95度10min。94℃预变性3min,94℃变性60s,44℃退火60s,72℃延伸60s,共35个循环,循环结束后,72℃延伸10min。
图中显示有的条带太暗了而且有的有弥散,引物正常。做过退火温度的梯度实验,有出来的条带但很淡。今晚做的条带更淡且有弥散。请问我该怎么调?
另外昨天做实验时水加少了,结果有的种类出来了,请问是预混酶浓度变化的问题吗?不知道哪位高人能帮帮分析一下?

未标题-2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hpzhao1980

新虫 (初入文坛)

你比我强,我做了一天发现没有跑出一个条带!!!!!
2楼2013-03-18 21:02:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1989zb

金虫 (小有名气)

一样啊 我一直做 一直都是条带暗 各种条件变了都一样
3楼2013-03-18 21:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastropoda

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

个人建意加大Taq酶的量试一下.
4楼2013-04-11 14:09:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1279341226

新虫 (初入文坛)

我现在正在做寄生蜂的这个该片段,用的同样的引物,不知道是不是虫子太小,而且用的是无损伤提取方法,连很淡的条带都没有,请问前辈做的是哪几种虫子呀,求助哇。。。
5楼2015-04-06 21:07:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 高照李 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +10 关忆北. 2026-04-14 10/500 2026-04-18 23:32 by 路病情
[考研] 一志愿沪9,326求生物学调剂 +12 刘墨墨 2026-04-13 12/600 2026-04-18 23:31 by 路病情
[考研] 297,工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考博] 申博/考博 +3 啃面包的小书虫 2026-04-17 4/200 2026-04-17 23:54 by 阳阳阳^_^
[考研] 化工学硕294分,求导师收留 +33 yzyzx 2026-04-12 37/1850 2026-04-17 23:00 by wunaiy88
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 5/250 2026-04-17 10:02 by bobvan
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +14 河南农业大学-能 2026-04-14 14/700 2026-04-16 14:41 by dingyanbo1
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[考研] 求调剂推荐 +8 小聂爱学习 2026-04-14 8/400 2026-04-16 07:22 by 学员JpLReM
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +4 白云123456789 2026-04-13 4/200 2026-04-16 00:18 by 粉沁若尘
[考研] 297,工科调剂? +10 河南农业大学-能 2026-04-14 10/500 2026-04-15 21:50 by noqvsozv
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +9 lzmk 2026-04-14 10/500 2026-04-15 20:02 by 学员JpLReM
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 各位老师好,求调剂,本科211,一志愿天津大学生物与医药学硕,差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 食品与营养(0955)271求调剂 +15 升格阿达 2026-04-12 16/800 2026-04-14 13:18 by 浮若_安生
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
信息提示
请填处理意见