| 查看: 3992 | 回复: 18 | ||
emmaya新虫 (初入文坛)
|
[求助]
RED重组敲除基因，PCR验证时既有目的基因条带也有打靶片段条带 已有4人参与
|
|
如题，欲敲除的是大肠杆菌K-12的C600分子伴侣GroEL基因，大小约为1700bp。用RED重组方法，电转入两边各带50bp同源臂的线性片段（大小约1100bp）后，对筛选出来的疑似敲除菌株抽基因组PCR验证。 引物为目的基因5’、3’端，扩增出来的条带有两条，既有没敲掉的原基因大小，也有线性片段的条带。 在目的基因上游和线性片段中间设计的一对引物，则只有一条带，且大小正确，理论上来讲线性片段应该交换到基因组上了； 对目的基因非同源臂部分，设计了一对引物，疑似敲除的菌株与原始菌扩增出来的条带大小一样，说明目的基因还在。 想请教，这个情况到底是为什么呢，怎么会两种情况同时出现，不是应该要么线性片段交换上要么没有吗？ 不知道问题出在哪里，有没有大牛有相似的经历的，什么办法可以解决呢？求给点意见！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有98人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 重组质粒目的基因PCR
已经有8人回复
- 酵母基因敲除，PCR验证遇到的问题。
已经有18人回复
- 为什么菌液PCR的条带比目的基因小很多。
已经有9人回复
- 已经得到目的基因的全长，现在要PCR将目的基因全长P出来，如何设计引物？谢谢
已经有12人回复
- PCR引物必须与目的基因片段的一小段序列互补吗？急！！！
已经有9人回复
- 基因组无条带，PCR有条带
已经有3人回复
- 乳杆菌基因组PCR结果未得到目的基因
已经有8人回复
- PCR扩增DNA序列无条带
已经有46人回复
- 我用sal Ⅰ和xho Ⅰ双酶切链接目的基因，菌落pcr能p出目的条带，但酶切切不开。
已经有18人回复
- 目的基因连接表达载体的质粒PCR验证，结果出现2条带
已经有10人回复
- 使用多对引物进行实时定量PCR后未得到实验结果，是否能说明目的基因不表达？
已经有10人回复
- 昆虫基因PCR后电泳条带淡，急求帮助？？？？
已经有4人回复
- RACE 3'基因pcr 泡出来的条带是100多bp!!!!到底是不是我的目的基因呀
已经有19人回复
- PCR空白跑出了与目的基因一样的一条浅带
已经有16人回复
- 基因敲入，同源重组
已经有10人回复
- 以酵母基因组为模板进行PCR扩增没有条带
已经有6人回复
- 基因组dna检测条带很亮 PCR扩增后条带非常弱 求助
已经有3人回复
- 做过用同源重组进行基因敲出的朋友请进，PCR做不出来！！
已经有16人回复
- 【求助/交流】关于基因敲除的方法
已经有18人回复
- 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
已经有7人回复
- 【求助/交流】请教关于大肠杆菌lamda RED重组问题
已经有23人回复
2楼2014-03-27 12:38:10
emmaya
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 923.8
- 帖子: 27
- 在线: 51小时
- 虫号: 2621197
- 注册: 2013-08-28
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2014-03-27 16:02:06
emmaya
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 923.8
- 帖子: 27
- 在线: 51小时
- 虫号: 2621197
- 注册: 2013-08-28
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2014-03-29 18:21:16
5楼2014-03-31 12:46:18
6楼2014-05-06 16:17:42
7楼2014-11-29 16:14:07
emmaya
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 923.8
- 帖子: 27
- 在线: 51小时
- 虫号: 2621197
- 注册: 2013-08-28
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
8楼2014-11-30 15:59:55
浅语8905
新虫 (小有名气)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 436.1
- 帖子: 125
- 在线: 34小时
- 虫号: 3438071
- 注册: 2014-09-24
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
9楼2015-01-30 12:26:00
10楼2015-05-12 20:34:33
