应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重组质粒目的基因PCR
91/1返回列表
查看: 1442  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

笑笑打dota

金虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒目的基因PCR 已有1人参与

重组质粒，PCR，电泳图成这样了，师兄说这是错配，完全看不懂是怎么回事啊，求大神指教啊
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 重组质粒PCR电泳.tif
    • 2014-03-24 12:12:11, 2.76 M

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-24 12:20:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猪尾巴草

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-24 18:50:09
请问你点了几微升样？如果是点两微升，PCR产物应该比较亮，你没有点阴性对照，原质粒PCR参照条带也没有，不好分析。
希望对你有帮助
赞一下 回复此楼
2楼2014-03-24 15:55:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笑笑打dota

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-03-24 15:55:28
请问你点了几微升样？如果是点两微升，PCR产物应该比较亮，你没有点阴性对照，原质粒PCR参照条带也没有，不好分析。
希望对你有帮助

阴性对照是什么？原质粒PCR参照条带是指空质粒PCR么？求指教啊，谢谢
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-25 08:59:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笑笑打dota

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-03-24 15:55:28
请问你点了几微升样？如果是点两微升，PCR产物应该比较亮，你没有点阴性对照，原质粒PCR参照条带也没有，不好分析。
希望对你有帮助

点了五微升的样还是这样，师兄说可能是引物错配啊什么的
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-25 09:14:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猪尾巴草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 笑笑打dota at 2014-03-25 08:59:32
阴性对照是什么？原质粒PCR参照条带是指空质粒PCR么？求指教啊，谢谢...

阴性对照就是PCR的时候，对应一管不加模版，这样可以看你引物，DDH2O,Buffer,酶，dNTP有没有被污染。
原质粒PCR参照条带是指你连接到重组质粒上的PCR产物，跑电泳时点上可以对应比较。
赞一下 回复此楼
5楼2014-03-25 12:10:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猪尾巴草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 笑笑打dota at 2014-03-25 09:14:58
点了五微升的样还是这样，师兄说可能是引物错配啊什么的...

可以把你的重组质粒用相应的酶切，看切出来的片段大小对不对
赞一下 回复此楼
6楼2014-03-25 12:14:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笑笑打dota

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-03-25 12:10:02
阴性对照就是PCR的时候，对应一管不加模版，这样可以看你引物，DDH2O,Buffer,酶，dNTP有没有被污染。
原质粒PCR参照条带是指你连接到重组质粒上的PCR产物，跑电泳时点上可以对应比较。...

哦，懂了。非常感谢啊。我还想问下，是我没说清楚，我的电泳图就是重组质粒后PCR跑的电泳，那不是跟你说的原质粒PCR参照条带是一个意思了？
赞一下 回复此楼
7楼2014-03-25 16:14:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笑笑打dota

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-03-25 12:14:53
可以把你的重组质粒用相应的酶切，看切出来的片段大小对不对...

听师兄说用单酶切的话，也会切出很多条带，会酶切不完全，请问会出现这种情况吗？
赞一下 回复此楼
8楼2014-03-25 16:16:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猪尾巴草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 笑笑打dota at 2014-03-25 16:16:35
听师兄说用单酶切的话，也会切出很多条带，会酶切不完全，请问会出现这种情况吗？...

是会有很多条带，一个质粒上的单酶切位点有的不止一个，你只要知道你构建的这个质粒的酶切位点有哪些，根据酶切位点选择一种酶来切，看是否能切下相应大小的片段（相应大小的片段是指该酶挨着的酶切位点之间的碱基数），将它和用同种酶切的原质粒比较即可，我一般选Hind III酶切。
赞一下 回复此楼
9楼2014-03-27 14:04:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 笑笑打dota 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 19:43 by lXgU0RvNTDC9
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 19:34 by lXgU0RvNTDC9
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 19:22 by lXgU0RvNTDC9
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 7/350 2026-08-23 19:10 by lXgU0RvNTDC9
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 5/250 2026-08-23 14:33 by KM5EcsNQRBPn
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 炎黄贵胄 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭