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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】诱导pkd46质粒表达不出目的蛋白
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鹏飞九万里

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】诱导pkd46质粒表达不出目的蛋白 已有10人参与

做基因敲除的过程中，我加入不同浓度的阿拉伯糖诱导pkd46表达exo，gam，beta蛋白，蛋白电泳后就是没有目的条带，也对诱导时间分别做了梯度，也没有目的条带。浓度分别从1-100做了近十个梯度，时间0-2.5小时。

不知道什么原因?请大家帮帮忙，谢谢！
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biosci

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1楼 2010-05-31 14:19:33
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yangjunzju

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-31 15:06:05
你确定PKD46转进去了吗？用什么方法转的，普通转化还是电转？最好是用电转，否则效率有点低。。。
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2楼2010-05-31 14:51:50
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鹏飞九万里

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yangjunzju at 2010-05-31 14:51:50:
你确定PKD46转进去了吗？用什么方法转的，普通转化还是电转？最好是用电转，否则效率有点低。。。

普通转化，我把pkd46导入到MG1655菌株中，平板上长了很多的...谢了！
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3楼2010-05-31 15:00:04
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鹏飞九万里

新虫 (初入文坛)
大家帮帮忙吧，小弟谢谢你们了！
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4楼2010-05-31 16:37:48
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 鹏飞九万里 at 2010-05-31 16:37:48:
大家帮帮忙吧，小弟谢谢你们了！

帮你顶~~
我最近也需要pKD46,可以赠送我你的质粒吗？非常感谢啦~~不知道你有什么需要的，交换也可以 ~~
赞一下(1人) 回复此楼
我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
5楼2010-10-07 22:14:50
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朱多龙

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
哪位好心的大虾可以赠送pKD46啊！也可以交换的，小弟不胜感激啊！
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6楼2012-10-29 21:44:32
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
7楼2013-03-06 09:59:24
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朱多龙

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你们诱导pKD46后跑蛋白之前对蛋白纯化了吗？如果没有纯化会有很多杂带的，根本看不清，最好再进行一下除盐。还有pKD46是温敏型的质粒，培养的温度合适吗？在30度培养。
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8楼2013-03-06 13:35:38
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
PKD46表达量本来也不高的
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9楼2013-03-06 13:53:29
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你做敲除，为什么还要测它的量呢，只要它在那个宿主菌里，就行诱导就可以啦，这个系统又没有说这个质粒要表达到什么程度，这样的话，你很难进行下面的实验了。
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10楼2015-02-03 00:50:51
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