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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】诱导pkd46质粒表达不出目的蛋白
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鹏飞九万里

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】诱导pkd46质粒表达不出目的蛋白 已有10人参与

做基因敲除的过程中，我加入不同浓度的阿拉伯糖诱导pkd46表达exo，gam，beta蛋白，蛋白电泳后就是没有目的条带，也对诱导时间分别做了梯度，也没有目的条带。浓度分别从1-100做了近十个梯度，时间0-2.5小时。

不知道什么原因?请大家帮帮忙，谢谢！
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1楼 2010-05-31 14:19:33
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朱多龙

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你们诱导pKD46后跑蛋白之前对蛋白纯化了吗？如果没有纯化会有很多杂带的，根本看不清，最好再进行一下除盐。还有pKD46是温敏型的质粒，培养的温度合适吗？在30度培养。
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8楼2013-03-06 13:35:38
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yangjunzju

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-31 15:06:05
你确定PKD46转进去了吗？用什么方法转的，普通转化还是电转？最好是用电转，否则效率有点低。。。
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2楼2010-05-31 14:51:50
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鹏飞九万里

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yangjunzju at 2010-05-31 14:51:50:
你确定PKD46转进去了吗？用什么方法转的，普通转化还是电转？最好是用电转，否则效率有点低。。。

普通转化，我把pkd46导入到MG1655菌株中，平板上长了很多的...谢了！
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3楼2010-05-31 15:00:04
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鹏飞九万里

新虫 (初入文坛)
大家帮帮忙吧，小弟谢谢你们了！
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4楼2010-05-31 16:37:48
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