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绿草如茵

木虫 (小有名气)

[求助] 如何去除质粒中的蛋白质

大家好,请教一下,如何去除提取的质粒DNA中的蛋白质,我的提取的质粒测浓度时发现A260/A280都在1.5左右,怕影响接下来的试验,想去除蛋白质,请问如何去除》?

[ Last edited by zhaohq1209 on 2012-4-9 at 13:19 ]
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路漫漫其修远兮,吾将上下而求索!
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

提基因会加蛋白酶K
同理你这个也可以,
但提完再去蛋白这样下来DNA会损失较大

最好开始时就去蛋白
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
2楼2012-04-04 21:45:23
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lwq652

木虫 (正式写手)

★
zhaohq1209: 金币+1, 细心的虫虫~鼓励鼓励~ 2012-04-05 10:56:37
文不对题
一念错,便觉百行皆非,防之当如渡海浮囊,勿容一针之罅漏
3楼2012-04-04 23:25:17
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shengxuejs

铁杆木虫 (正式写手)

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质粒的话应该浓度不低吧?通常的作法是酚氯仿抽提,具体的配方可以查分子克隆。原理是利用醇、酚和氯仿三种溶剂对dna及蛋白质的不同溶解度,釆用离心的方式使其分离。提纯后,能较好的去除蛋白质,保证酶切或pcr的顺利进行。
学无止尽,沧海扁舟。
4楼2012-04-04 23:48:37
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
酚氯仿异戊醇抽提去蛋白,氯仿异戊醇抽提去酚,然后醇沉,70%乙醇去盐,然后重新溶到TE buffer里即可~~~
5楼2012-04-05 09:29:28
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)

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用试剂盒可以纯化一下,可以去除
快乐奋斗,创造所有。
6楼2012-04-05 09:54:32
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zx6291

铜虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
使用生工的质粒抽提试剂盒中的去蛋白液可以去除
7楼2012-04-05 10:39:42
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

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一般抽质粒的试剂盒都不会有这么多蛋白,很可能楼主在中和后吸取上清时吸到了白色的沉淀物。仅供参考
8楼2012-04-05 16:42:57
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wlwabcd

铜虫 (正式写手)

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天根的质粒提取试剂盒里有“去蛋白液”试剂,你可以试试。不过我们一般不用“去蛋白液”只有个别菌株才会使用
9楼2012-04-06 21:27:05
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

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两个思路都可以用,其一去除蛋白,比如用饱和酚(Tris-HCl缓冲溶液)变性抽提蛋白质或者蛋白酶K溶液(含蛋白酶K,SDS,EDTA,ddH2O);其二纯化质粒DNA,用饱和乙醇沉淀DNA.
10楼2012-04-20 09:45:12
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