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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何去除质粒中的蛋白质
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绿草如茵

木虫 (小有名气)

[求助] 如何去除质粒中的蛋白质

大家好，请教一下，如何去除提取的质粒DNA中的蛋白质，我的提取的质粒测浓度时发现A260/A280都在1.5左右，怕影响接下来的试验，想去除蛋白质，请问如何去除》？

[ Last edited by zhaohq1209 on 2012-4-9 at 13:19 ]
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索！
1楼 2012-04-04 21:33:47
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wlwabcd

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
天根的质粒提取试剂盒里有“去蛋白液”试剂，你可以试试。不过我们一般不用“去蛋白液”只有个别菌株才会使用
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9楼2012-04-06 21:27:05
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
提基因会加蛋白酶K
同理你这个也可以，
但提完再去蛋白这样下来DNA会损失较大

最好开始时就去蛋白
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
2楼2012-04-04 21:45:23
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shengxuejs

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒的话应该浓度不低吧？通常的作法是酚氯仿抽提，具体的配方可以查分子克隆。原理是利用醇、酚和氯仿三种溶剂对dna及蛋白质的不同溶解度，釆用离心的方式使其分离。提纯后，能较好的去除蛋白质，保证酶切或pcr的顺利进行。
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学无止尽，沧海扁舟。
4楼2012-04-04 23:48:37
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酚氯仿异戊醇抽提去蛋白，氯仿异戊醇抽提去酚，然后醇沉，70%乙醇去盐，然后重新溶到TE buffer里即可~~~
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5楼2012-04-05 09:29:28
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