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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取重组质粒进行双酶切之后什么条带也没有，怎么回事？？
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取重组质粒进行双酶切之后什么条带也没有，怎么回事？？

构建载体后提取重组质粒进行PCR鉴定有目的条带，但是双酶切鉴定后就会什么条带都没有了，一片空白，有maker，一起跑的其他基因也有条带，这种情况一直持续，到底是怎么回事呢？？求助
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1楼2013-06-24 22:58:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
我晴天一片(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:48:27
跑没做酶切的重组质粒了吗？有可能是酶有问题，换其它的酶试试。
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2楼2013-06-24 23:18:34
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
我晴天一片(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:48:33
酶的量，酶切时间。加的质粒的量。都要合适。可以从这几方面着手。。祝顺利
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3楼2013-06-24 23:22:07
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我晴天一片

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-24 23:18:34
跑没做酶切的重组质粒了吗？有可能是酶有问题，换其它的酶试试。

同样的酶切空载和目的基因都有条带，但是一切重组的质粒进行鉴定时就没条带了，一片空白啊……
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4楼2013-06-25 19:24:27
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 我晴天一片 at 2013-06-25 19:24:27
同样的酶切空载和目的基因都有条带，但是一切重组的质粒进行鉴定时就没条带了，一片空白啊……...

我是说可能重组质粒提得不好。你是否跑了没有酶切的质粒做对照？
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5楼2013-06-26 02:18:29
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不酶切，跑跑看有条带不啊，你确认提出来质粒了吗？
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6楼2013-06-26 20:08:17
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cqq309

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
什么条带都没有应该是质粒没提好，即使酶有问题，也应该有质粒的条带。你提完质粒以后可以先跑胶看看。
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7楼2013-06-27 13:15:34
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zou43118217

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
拿酶切前质粒做为对照跑胶看看是提取质粒的问题还是什么
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8楼2013-06-27 20:45:34
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